發(fā)布時間：2022-11-12 17:25

　　研究目的根據(jù)2014年世界衛(wèi)生組織發(fā)表的全球癌癥報告,全球癌癥患者和死亡病例都在急劇地增加,中國新增癌癥病例高居亞洲第一位。癌癥已成為人類最主要的致死疾病之一,化學(xué)療法是目前癌癥治療的主要手段,但是化療副作用及其并發(fā)癥給腫瘤病人的健康帶來了極大的威脅,因此為開發(fā)具有高度特異性、更低副作用及更高效的抗腫瘤藥物提供新的靶標和新的腫瘤治療策略顯得尤為重要。sirtuins家族蛋白因其與生物體的壽命相關(guān),并且是一類可能的新型抗腫瘤藥物靶點近年得到科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。哺乳動物sirtuins （SIRT1-7）是一類依賴于NAD+的Ⅲ型組蛋白去乙�；浮＾D(zhuǎn)錄后修飾和表觀遺傳修飾在調(diào)控蛋白活性方面起著重要作用,而蛋白活性的改變可能導(dǎo)致生物體代謝活動的變化,從而引起許多疾病,比如癌癥。就目前的研究來看,sirtuins家族的蛋白在調(diào)控腫瘤發(fā)生中扮演著重要角色。一方面,這類蛋白可能作為腫瘤抑制因子發(fā)揮著其生物學(xué)功能。另一方面,還有證據(jù)證明sirtuins也能促進腫瘤發(fā)生。因此,有很多以sirtuins基因為靶點的化合物都涌現(xiàn)出來。在本研究中,我們使用了一種小分子化合物salermide,它是一種sir... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
    1 肺癌
    2 腫瘤與組蛋白去乙�；�
    3 去乙�；讣易宓鞍譻irtuins
        3.1 sirtuins與衰老
        3.2 sirtuins與癌癥
    4 細胞自噬
        4.1 自噬概述
        4.2 細胞自噬與腫瘤
    5 細胞凋亡
        5.1 凋亡概述
        5.2 細胞凋亡與細胞自噬
    6 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡和細胞自噬
        6.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞自噬
        6.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡
實驗材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 細胞系及細胞培養(yǎng)所需材料
        1.2 實驗試劑及抗體
        1.3 siRNA
        1.4 質(zhì)粒
        1.5 主要實驗設(shè)備及儀器
        1.6 實驗所需主要溶液及試劑配方
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 轉(zhuǎn)染
        2.3 基因克隆
        2.4 免疫印跡
        2.5 免疫共沉淀
        2.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
        2.7 統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析
實驗結(jié)果
    1 salermide誘導(dǎo)人非小細胞肺癌細胞自噬
        1.1 salermide誘導(dǎo)細胞形成自噬小體
        1.2 salermide上調(diào)細胞中MAP1LC3B蛋白表達
        1.3 salermide誘導(dǎo)細胞形成自噬流
    2 抑制SIRT1/2促進細胞自噬
        2.1 敲低SIRT1/2誘導(dǎo)細胞形成自噬小體
        2.2 敲低SIRT/2上調(diào)細胞中MAP1LC3B蛋白的表達
    3 抑制SIRT1/2抑制MTOR并上調(diào)ATF4、DDIT4
        3.1 salermide抑制MTOR信號通路并上調(diào)ATF4、DDIT4
        3.2 敲低SIRT1/2抑制MTOR信號通路并上調(diào)ATF4、DDIT4
    4 抑制SIRT1/2通過ATF4-DDIT4-MTOR信號通路誘導(dǎo)自噬
        4.1 敲低ATF4后抑制DDIT4的表達
        4.2 敲低DDIT4后恢復(fù)了MTOR信號通路
        4.3 過表達DDIT4促進MAP1LC3B的表達
        4.4 敲低ATF4后抑制DDIT4并恢復(fù)MTOR信號通路
        4.5 敲低ATF4和DDIT4后抑制了自噬小體的形成
    5 抑制SIRT1/2使HSPA5乙�；⑴cEIF2AK3解離
        5.1 抑制SIRT1/2使HSPA5與EIF2AK3解離
        5.2 抑制SIRT1/2使HSPA5乙�；潭壬�
    6 HSPA5與SIRT1/2相互作用的結(jié)構(gòu)域
        6.1 HSPA5、SIRT1和SIRT2的結(jié)構(gòu)域
        6.2 HSPA5與SIRT1相互作用的結(jié)構(gòu)域
        6.3 HSPA5與SIRT2相互作用的結(jié)構(gòu)域
    7 抑制SLM誘導(dǎo)的細胞自噬促進細胞凋亡
        7.1 敲低ATG5上調(diào)CASP8、CASP3、PARP1的表達
        7.2 敲低ATG5后凋亡細胞比例增加
討論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Autophagy and cancer[J]. Si-Zhao Lu,Duygu Dee Harrison-Findik.  World Journal of Biological Chemistry. 2013(03)
[2]植物程序性細胞死亡檢測技術(shù)[J]. 徐昌杰,陳昆松,Hong Ding,IonaE.Weir,IanB.Ferguson.  遺傳. 2004(01)



本文編號：3706776