肝外膽管癌是一種發(fā)生于肝外膽道系統(tǒng)的惡性腫瘤,肝外膽管癌惡性程度高,容易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移,不容易診斷,難于治療,對放化療不敏感是其主要臨床特征。先天性膽管囊腫、原發(fā)性硬化性膽管炎和膽石癥等是肝外膽管癌的主要誘發(fā)因素。在全球范圍內(nèi),膽管癌的發(fā)病率有逐漸上升趨勢,雖然近年來肝外膽管癌在診斷和治療等方面的研究有一定突破,但進(jìn)展緩慢,膽管癌的發(fā)生發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移具體機(jī)制仍不明確,仍然缺少對肝外膽管癌有效的診斷和治療靶點。因此,進(jìn)一步尋找生物靶標(biāo),將對肝外膽管癌的診斷和治療以及患者預(yù)后的判斷帶來深遠(yuǎn)的影響。最近,針對microRNA與腫瘤的關(guān)系研究逐漸增多,成為科研熱點難點。miRNAs是一種RNA,它們具有重要功能,卻不編碼蛋白質(zhì),約21-25nt大小的單鏈。microRNA具有特殊特異性結(jié)合靶基因來調(diào)控其表達(dá)。microRNA的異常表達(dá)不僅參與調(diào)解正常人體的多種生物學(xué)功能,目前研究發(fā)現(xiàn)miRNAs還與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),甚至參與調(diào)解惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移進(jìn)程。在不同的腫瘤類型中,不同種類的microRNA呈現(xiàn)抑癌基因和癌基因的不同角色。其主要的作用機(jī)制包括:表觀遺傳水平改變,microRNA位... 

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
文獻(xiàn)綜述
第1章 miR-221以及PTEN在肝外膽管癌組織、細(xì)胞系中的表達(dá)情況和二者關(guān)系的研究,并深入探討二者在肝外膽管癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制
    前言
    第1節(jié) miR-221及其下游基因PTEN、β-catenin、c-Jun在肝外膽管癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)情況
        材料和方法
            1 研究對象
                1.1 肝外膽管癌及癌旁組織標(biāo)本
                1.2 細(xì)胞系
            2 儀器設(shè)備與實驗試劑
                2.1 主要實驗儀器
                2.2 主要試劑與耗材
            3 實驗方法
                3.1 主要溶液的配制
                3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
                3.3 細(xì)胞復(fù)蘇
                3.4 細(xì)胞凍存
                3.5 PCR引物設(shè)計合成
                3.6 miR-221mimics和miR-221反義核酸的合成
                3.7 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
                3.8 瞬時轉(zhuǎn)染miR-221的成熟體(mimics)和抑制子(inhibitor)
                3.9 熒光素酶實驗報告基因活性測定
                3.10 蛋白免疫印跡分析(westernBlot)
                3.11 統(tǒng)計學(xué)方法
        結(jié)果
            1 肝外膽管癌組織、癌旁組織以及膽管癌細(xì)胞系中miR-221的表達(dá)水平
                1.1 肝外膽管癌組織和癌旁組織組中miR-221表達(dá)水平的比較
                1.2 正常膽管上皮細(xì)胞以及膽管癌細(xì)胞系中miR-221表達(dá)水平的比較
            2 肝外膽管癌組織、癌旁組織中PTEN、β-catenin、c-Jun的表達(dá)水平及其與miR-221的關(guān)系
                2.1 肝外膽管癌組織和癌旁組織組中PTEN、β-catenin、c-Jun表達(dá)水平的比較
                2.2 肝外膽管癌中miR-221表達(dá)水平與PTEN的關(guān)系
                2.3 肝外膽管癌中miR-221表達(dá)水平與患者預(yù)后明顯相關(guān),是肝外膽管癌的獨立預(yù)后因素
    第2節(jié) miR-221在肝外膽管癌細(xì)胞系中靶向調(diào)控下游基因PTEN
        材料和方法
            1 研究對象
            2 儀器設(shè)備與實驗試劑
                2.1 主要實驗儀器
                2.2 主要試劑與耗材
            3 實驗方法
                3.1 肝外膽管癌細(xì)胞系QBC939和HuCCT1的培養(yǎng)
                3.2 質(zhì)粒重組、轉(zhuǎn)化、抽提和鑒定
                3.4 突變質(zhì)粒的合成、轉(zhuǎn)化和鑒定
                3.5 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
                3.6 熒光素酶報告實驗
                3.7 總RNA的提取以及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后細(xì)胞系中miR-221表達(dá)水平的檢測
                3.8 總蛋白的提取和蛋白質(zhì)的濃度測定
                3.9 WesternBlot檢測PTEN蛋白的表達(dá)情況
                3.10 統(tǒng)計學(xué)方法
        實驗結(jié)果
            1 基因軟件預(yù)測miR-221下游靶基因
            2 qRT-PCR檢測miR-221inhibitor轉(zhuǎn)染后miR-221在膽管癌細(xì)胞系中表達(dá)情況
            3 雙熒光素酶報告實驗驗證PTEN是miR-221的下游靶基因之一
            4 抑制miR-221表達(dá)對肝外膽管癌細(xì)胞系中PTEN蛋白表達(dá)的影響
    第3節(jié) miR-221通過抑制PTEN表達(dá)誘導(dǎo)肝外膽管癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,促進(jìn)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移
        材料和方法
            1 研究對象
            2 實驗儀器與試劑
                2.1 主要實驗儀器
                2.2 主要試劑與耗材
            3 實驗方法
                3.1 肝外膽管癌細(xì)胞系QBC939和HuCCT1的培養(yǎng)
                3.2 miR-221inhibitor的轉(zhuǎn)染
                3.3 蛋白質(zhì)的提取
                3.4 westernblot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況
                3.5 miR-221對膽管癌細(xì)胞侵襲能力的影響
                3.6 統(tǒng)計學(xué)方法
        結(jié)果
            1 miR-221直接抑制PTEN表達(dá)促進(jìn)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移
            2 miR-221直接抑制PTEN表達(dá)促進(jìn)肝外膽管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
    討論
第2章 β-catenin/c-Jun通路在miR-221調(diào)節(jié)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用的研究
    前言
    第1節(jié) β-catenin/c-Jun信號通路參與miR-221誘導(dǎo)肝外膽管癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,促進(jìn)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移
        材料和方法
            1 研究對象
            2 實驗儀器與試劑
            3 實驗方法
                3.1 肝外膽管癌細(xì)胞系QBC939和HuCCT1的培養(yǎng)
                3.2 miR-221inhibitor的轉(zhuǎn)染
                3.3 蛋白質(zhì)的提取
                3.4 western blot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況
                3.5 miR-221對膽管癌細(xì)胞侵襲能力的影響
                3.6 統(tǒng)計學(xué)方法
        結(jié)果
            1 miR-221激活β-catenin/c-Jun信號通路促進(jìn)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移
            2 β-catenin/c-Jun信號通路參與miR-221誘導(dǎo)肝外膽管癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,促進(jìn)肝外膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移
    第2節(jié) β-catenin/c-Jun信號通路促進(jìn)miR-221的表達(dá)
        材料和方法
            1 研究對象
            2 實驗儀器與試劑
                2.1 主要實驗儀器
                2.2 主要試劑與耗材
            3 實驗方法
                3.1 肝外膽管癌細(xì)胞系QBC939和HuCCT1的培養(yǎng)
                3.2 蛋白質(zhì)的提取
                3.3 western blot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況
                3.4 qRT-PCR檢測miR-221表達(dá)
                3.5 統(tǒng)計學(xué)方法
        實驗結(jié)果
            1 sic-Jun使c-Jun蛋白表達(dá)降低,BIO激活c-Jun表達(dá)
            2 β-catenin/c-Jun信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)miR-221的表達(dá)
    討論
第3章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個人簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]肝門部膽管癌中CD133的表達(dá)及RNA干擾抑制對膽管癌細(xì)胞增殖的影響[J]. 張升濤,劉斌,常琦,姬樂,王加中.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2016(11)
[3]microRNA-21在膽管癌發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展[J]. 李黑黑,劉建生.  中華消化外科雜志. 2016 (07)
[4]增殖細(xì)胞核抗原蛋白和mRNA在膽管癌中的表達(dá)及其意義[J]. 邊偉,穆宏凌,劉三光,劉建華,路文彥.  中華實驗外科雜志. 2010 (07)
[5]Cholangiocarcinoma:A compact review of the literature[J]. Yucel Ustundag,Yusuf Bayraktar.  World Journal of Gastroenterology. 2008(42)
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[7]PTEN/PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其意義[J]. 廖東衛(wèi),王莉,張新光,劉銘球.  癌癥. 2006(10)
[8]Correlation between Protein Expression of PTEN in Human Pancreatic Cancer and the Proliferation,Infiltration,Metastasis and Prognosis[J]. 陶京,熊炯炘,李弢,楊智勇,李曉輝,李凱,吳河水,王春友.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)英德文版). 2006(04)
[9]Effect of mutated IKBa transfection on multidrug resistance in hilar cholangiocarcinoma cell lines[J]. Ru-Fu Chen, Xian-He Kong, Ji-Sheng Chen, Department of Hepatobiliary Surgery, The Second Affiliated Hospital of Zhongshan University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China Zhi-Hua Li, Department of Oncology, The Second Affiliated Hospital of Zhongshan University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(05)



本文編號：3697912