目的環(huán)狀RNA（circular RNA,circRNA）是一種特殊的內(nèi)源性非編碼RNA（non-coding RNA,ncRNAs）。多項(xiàng)研究均表明,大量的環(huán)狀RNA在肺癌（Lung Cancer,LC）中表達(dá)失調(diào)并影響病情的進(jìn)展和預(yù)后。但是,環(huán)狀RNA在肺癌中的分子機(jī)制還未得到明確闡明。本文通過(guò)對(duì)芯片測(cè)序的結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析、選取特定的環(huán)狀RNA（circZMYM4）分子,旨在探究circZMYM4在肺癌中的作用,明確circZMYM4的生物學(xué)功能及影響肺癌的分子機(jī)制,從而為肺癌的預(yù)后提供分子標(biāo)志物,甚至為肺癌的治療提供潛在的干預(yù)靶點(diǎn)。方法（1）篩選并鑒定與肺癌相關(guān)的circRNA:從公共數(shù)據(jù)庫(kù)的組織芯片中尋找和篩選在肺癌和癌旁組織中有顯著差異表達(dá)的環(huán)狀RNA（circZMYM4）。通過(guò)特異性反向引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）、瓊脂糖凝膠電泳、Sanger測(cè)序及核酸外切酶（RNase R）耐受實(shí)驗(yàn),對(duì)circZMYM4的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、成環(huán)位點(diǎn)及穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitativ... 

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
1 材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.5 組織芯片
    1.6 臨床肺癌組織樣本
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 生物信息學(xué)數(shù)據(jù)的獲得與分析
    2.2 基本分子實(shí)驗(yàn)
        2.2.1 RNA的提取
        2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄cDNA實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 Sanger測(cè)序
        2.2.7 蛋白提取
        2.2.8 測(cè)定蛋白濃度
        2.2.9 Western Blot
        2.2.10 siRNA、過(guò)表達(dá)載體及過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建
    2.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    2.4 特殊功能及機(jī)制實(shí)驗(yàn)
        2.4.1 RNase R實(shí)驗(yàn)
        2.4.2 熒光原位雜交(Fish)實(shí)驗(yàn)
        2.4.3 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.4.4 EdU實(shí)驗(yàn)
        2.4.5 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.4.6 RNA Pulldown實(shí)驗(yàn)
        2.4.7 RNA-IP實(shí)驗(yàn)
        2.4.8 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    2.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.5.1 裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 確定研究目標(biāo)為circZMYM4
    2 circZMYM4 的鑒定
    3 circZMYM4 在肺癌中表達(dá)水平顯著降低
    4 circZMYM4 的定位
    5 過(guò)表達(dá)circZMYM4 抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)
    6 circZMYM4 可以和YBX1 蛋白結(jié)合
    7 circZMYM4 可通過(guò)阻止YBX1 的入核抑制肺癌的發(fā)展
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]環(huán)狀RNA UBAP2沉默對(duì)肺癌A549細(xì)胞體外增殖和侵襲的影響及機(jī)制[J]. 殷玉敬,高輝,郭佳,高洋.  中國(guó)肺癌雜志. 2017(12)
[2]環(huán)狀RNA CircHIPK3通過(guò)miR-379調(diào)控IGF1表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H1299與NCI-H2170的細(xì)胞增殖[J]. 田芳,王云,肖哲,朱學(xué)軍.  中國(guó)肺癌雜志. 2017(07)
[3]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文編號(hào)：3691071