目的環(huán)狀RNA（circular RNA,circRNA）是一種特殊的內源性非編碼RNA（non-coding RNA,ncRNAs）。多項研究均表明,大量的環(huán)狀RNA在肺癌（Lung Cancer,LC）中表達失調并影響病情的進展和預后。但是,環(huán)狀RNA在肺癌中的分子機制還未得到明確闡明。本文通過對芯片測序的結果進行生物信息學分析、選取特定的環(huán)狀RNA（circZMYM4）分子,旨在探究circZMYM4在肺癌中的作用,明確circZMYM4的生物學功能及影響肺癌的分子機制,從而為肺癌的預后提供分子標志物,甚至為肺癌的治療提供潛在的干預靶點。方法（1）篩選并鑒定與肺癌相關的circRNA:從公共數據庫的組織芯片中尋找和篩選在肺癌和癌旁組織中有顯著差異表達的環(huán)狀RNA（circZMYM4）。通過特異性反向引物進行逆轉錄PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）、瓊脂糖凝膠電泳、Sanger測序及核酸外切酶（RNase R）耐受實驗,對circZMYM4的環(huán)狀結構、成環(huán)位點及穩(wěn)定性進行檢測。通過實時熒光定量PCR（real-time quantitativ... 

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
1 材料
    1.1 實驗儀器
    1.2 實驗耗材與試劑
    1.3 實驗細胞
    1.4 實驗動物
    1.5 組織芯片
    1.6 臨床肺癌組織樣本
2 實驗方法
    2.1 生物信息學數據的獲得與分析
    2.2 基本分子實驗
        2.2.1 RNA的提取
        2.2.2 逆轉錄cDNA實驗
        2.2.3 PCR實驗
        2.2.4 實時熒光定量PCR實驗
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 Sanger測序
        2.2.7 蛋白提取
        2.2.8 測定蛋白濃度
        2.2.9 Western Blot
        2.2.10 siRNA、過表達載體及過表達穩(wěn)轉細胞株的構建
    2.3 細胞實驗
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 細胞轉染
    2.4 特殊功能及機制實驗
        2.4.1 RNase R實驗
        2.4.2 熒光原位雜交(Fish)實驗
        2.4.3 MTT實驗
        2.4.4 EdU實驗
        2.4.5 Transwell實驗
        2.4.6 RNA Pulldown實驗
        2.4.7 RNA-IP實驗
        2.4.8 免疫熒光實驗
    2.5 動物實驗
        2.5.1 裸鼠皮下荷瘤實驗
    2.6 統(tǒng)計學分析
結果
    1 確定研究目標為circZMYM4
    2 circZMYM4 的鑒定
    3 circZMYM4 在肺癌中表達水平顯著降低
    4 circZMYM4 的定位
    5 過表達circZMYM4 抑制肺癌細胞生長
    6 circZMYM4 可以和YBX1 蛋白結合
    7 circZMYM4 可通過阻止YBX1 的入核抑制肺癌的發(fā)展
討論
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]環(huán)狀RNA UBAP2沉默對肺癌A549細胞體外增殖和侵襲的影響及機制[J]. 殷玉敬,高輝,郭佳,高洋.  中國肺癌雜志. 2017(12)
[2]環(huán)狀RNA CircHIPK3通過miR-379調控IGF1表達促進非小細胞肺癌細胞系NCI-H1299與NCI-H2170的細胞增殖[J]. 田芳,王云,肖哲,朱學軍.  中國肺癌雜志. 2017(07)
[3]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文編號：3691071