發(fā)布時間：2022-08-07 16:45

　　目的:泛素偶聯(lián)酶（ubiquitin-conjugating enzyme）UBE2C的主要功能是作為促細(xì)胞有絲分裂后期復(fù)合物（anaphase promoting complex/cyclosome,APC/C）泛素連接酶（E3）的一種泛素偶聯(lián)酶,參與細(xì)胞周期蛋白和有絲分裂相關(guān)因子的泛素化修飾過程,從而發(fā)揮其促進細(xì)胞有絲分裂進程的作用。UBE2C的過表達(dá)能夠抑制有絲分裂紡錘體檢查點（spindle assembly checkpoint,SAC）,使其失去監(jiān)測功能,引起APC/C的持續(xù)活化及CyclinB的泛素化降解,最終導(dǎo)致染色體的錯誤分離,以及非整倍體細(xì)胞的產(chǎn)生。早期研究表明,UBE2C的過表達(dá)能夠促進腫瘤的增殖和侵襲,并與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)。然而,目前UBE2C在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制有待于進一步研究。本課題旨在通過檢測UBE2C在胃癌組織及血清中的表達(dá)情況,分析其與胃癌患者的臨床、病理特征以及患者預(yù)后的相關(guān)性,并探討其作為胃癌血清分子標(biāo)志物的可能性;同時,通過體外細(xì)胞實驗進一步闡明UBE2C在胃癌細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控中的作用及機制,從而為胃癌的早期診斷治療及精準(zhǔn)治療... 

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
    結(jié)果
一、UBE2C在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗對象
        1.1.2 主要儀器
        1.1.3 實驗材料
        1.1.4 實驗試劑
        1.1.5 試驗方法
            1.1.5.1 WesternBlot
            1.1.5.2 qRT-PCR
            1.1.5.3 HE染色
            1.1.5.4 IHC
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 UBE2C蛋白在胃癌及癌旁正常組織中表達(dá)情況
            1.2.1.1 WesternBlot結(jié)果
            1.2.1.2 qRT-PCR檢測結(jié)果
        1.2.2 免疫組化結(jié)果
            1.2.2.1 UBE2C在胃癌中的表達(dá)
            1.2.2.2 胃癌患者UBE2C蛋白表達(dá)與Ki67、Her-2的關(guān)系
            1.2.2.3 UBE2C蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
        1.2.3 Kaplan-Meier曲線結(jié)果
        1.2.4 預(yù)后因素分析
    1.3 討論
        1.3.1 UBE2C蛋白表達(dá)與患者年齡
        1.3.2 UBE2C蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
        1.3.3 UBE2C表達(dá)與漿膜浸潤
        1.3.4 UBE2C蛋白表達(dá)與Ki-67的關(guān)系
        1.3.5 UBE2C蛋白表達(dá)與Her-2的關(guān)系
    1.4 小結(jié)
二、慢病毒介導(dǎo)RNA干擾UBE2C基因?qū)ξ赴┘?xì)胞株作用的實驗研究
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗方法
            2.1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.4.2 Westernbolt
            2.1.4.3 慢病毒顆粒構(gòu)建、轉(zhuǎn)化、重組、提取及滴度測定
            2.1.4.4 慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞及檢測UBE2C基因沉默水平
            2.1.4.5 WST-1法檢測細(xì)胞增殖
            2.1.4.6 流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期
            2.1.4.7 流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
            2.1.4.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 UBE2C蛋白在細(xì)胞系中表達(dá)情況
        2.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建測序、敲降效率的驗證
        2.2.3 敲降UBE2C后對細(xì)胞增殖的影響
        2.2.4 流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.5 流式細(xì)胞技術(shù)檢測敲降UBE2C后對細(xì)胞凋亡結(jié)果
        2.2.6 敲降UBE2C表達(dá)對相關(guān)蛋白及通路的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、胃癌患者血清中UBE2C表達(dá)的初步研究
    3.1 對象與方法
        3.1.1 標(biāo)本收集
        3.1.2 儀器與試劑
        3.1.3 研究方法
        3.1.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 胃癌患者、慢性胃炎患者及正常人群血清UBE2C含量
        3.2.2 胃癌患者手術(shù)前后血清中UBE2C的含量
        3.2.3 胃癌患者血清中UBE2C的含量與臨床、病理參數(shù)之間的關(guān)系
    3.3 討論
        3.3.1 胃癌患者血清中UBE2C的含量
        3.3.2 胃癌患者手術(shù)前后血清中UBE2C含量
        3.3.3 胃癌患者血清中UBE2C蛋白表達(dá)與Lauren分型
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 泛素偶聯(lián)酶UBE2C與腫瘤的關(guān)系
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3670681