目的本課題的研究旨在探索基質(zhì)金屬蛋白酶1和7（MMP1\7）是否為人舌鱗狀細(xì)胞癌的促癌基因以及其是否影響舌癌細(xì)胞增殖遷移及侵襲,以期為舌癌的早期分子診斷以及靶向治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和臨床證據(jù)。方法第一部分:選取收集的五對人舌鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行癌和癌旁組織的轉(zhuǎn)錄組二代測序,得到相應(yīng)的差異基因MMP1\7,為了驗(yàn)證結(jié)果的可靠性,另選53對舌癌標(biāo)本運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測其mRNA表達(dá)的情況,并通過免疫組化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)其在蛋白水平表達(dá)是否存在差異。第二部分:體外合成相應(yīng)的siRNA干擾序列和經(jīng)過測序鑒定序列正確的過表達(dá)質(zhì)粒pCDH-CMV-MCS-EF1–Puro-MMP1\7（以下簡稱pCDH-MMP1\7）,轉(zhuǎn)染人舌癌細(xì)胞CAL27\SCC9后利用RT-PCR技術(shù)和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別在mRNA和蛋白水平驗(yàn)證MMP1\7的干擾和過表達(dá)效果;通過CCK8增殖實(shí)驗(yàn)和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)探討當(dāng)抑制和過表達(dá)MMP1\7基因后舌癌細(xì)胞增殖能力的變化;采用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)以及侵襲小室實(shí)驗(yàn)研究抑制和過表達(dá)MMP1\7基因?qū)ι喟┘?xì)胞遷移、侵襲能力的影響。第三部分:本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Notch信號通路和WN... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 試劑配方
附錄三 主要儀器設(shè)備
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 人舌癌標(biāo)本轉(zhuǎn)錄組二代測序及驗(yàn)證
    材料與方法
    結(jié)果
第二部分 siRNA干擾和質(zhì)粒過表達(dá)MMP1\7基因?qū)θ松圜[癌細(xì)胞株CAL27\SCC9增殖及侵襲能力的影響
    材料與方法
    結(jié)果
第三部分 MMP1\7基因促進(jìn)舌鱗癌細(xì)胞增殖及遷移侵襲的分子機(jī)制
    材料方法
    結(jié)果
第四部分 MMP7在裸鼠舌癌正位高轉(zhuǎn)移模型移植瘤中促進(jìn)舌癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移
    材料與方法
    結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3661187