發(fā)布時間：2022-07-11 14:05

　　目的:制備一種新型的以CD59配體肽（CD59 specific ligand peptide,CD59sp）為引導(dǎo)肽,負(fù)載藻藍(lán)蛋白（C-phycocyanin,C-PC）的羧甲基殼聚糖（Carboxymethyl chitosan,CMC）納米微球（C-PC/CMC-CD59sp）,并對其特征及靶向抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行研究,以實現(xiàn)藻藍(lán)蛋白對HeLa細(xì)胞的靶向治療。方法:采用離子交聯(lián)法制備靶向羧甲基殼聚糖納米載藥顆粒,用響應(yīng)面優(yōu)化法選出最佳條件。利用透射電鏡、激光粒度儀、紅外光譜儀等觀察納米微球表征,MTT法檢測靶向納米顆粒對He La細(xì)胞生長的影響,溶血實驗檢測納米顆粒的組織相容性及安全性,共聚焦顯微鏡檢測He La細(xì)胞對納米微球的攝入及納米微球?qū)e La細(xì)胞形態(tài)的影響,western blot檢測cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表達(dá),免疫熒光法檢測Bcl-2蛋白的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測He La細(xì)胞周期的變化。結(jié)果:優(yōu)化了納米微球的制備條件,獲得納米級微球。最佳制備條件為:CMC與C-PC投藥量為3:1,CMC濃度為2.0mg/ml,Ca Cl2濃度為1... 

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 實驗材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 藥品
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 細(xì)胞株及血液
    1.2 納米微球的制備
        1.2.1 藻藍(lán)蛋白濃度測定
        1.2.2 C-PC/CMC-NPs制備
        1.2.3 優(yōu)選制備條件
        1.2.4 靶向納米微球制備
    1.3 納米微球性質(zhì)檢測
        1.3.1 透射電鏡檢測
        1.3.2 激光粒度儀檢測
        1.3.3 紅外光譜儀檢測
        1.3.4 包封率和載藥量測定
        1.3.5 藥物體外釋放測定
        1.3.6 藥物安全性評價
    1.4 納米微球體外細(xì)胞實驗
        1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)及爬片
        1.4.2 細(xì)胞實驗分組
        1.4.3 MTT法檢測藥物對細(xì)胞增殖的影響
        1.4.4 共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞對納米微球的攝入情況
        1.4.5 免疫熒光法檢測Bcl-2 蛋白的表達(dá)
        1.4.6 Western Blot法檢測cleaved caspase-3/PARP蛋白的表達(dá)
        1.4.7 共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞形態(tài)變化
        1.4.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測對細(xì)胞周期的影響
    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析
第二章 實驗結(jié)果
    2.1 C-PC/CMC-NPs性質(zhì)檢測
        2.1.1 優(yōu)選制備條件
        2.1.2 表面形態(tài)
        2.1.3 粒徑分布
        2.1.4 官能團(tuán)變化
        2.1.5 藥物體外釋放
        2.1.6 藥物安全性評估
    2.2 細(xì)胞相關(guān)實驗檢測
        2.2.1 納米微球抑制細(xì)胞的增殖
        2.2.2 納米微球靶向攝入細(xì)胞
        2.2.3 免疫熒光檢測Bcl-2 蛋白的表達(dá)水平
        2.2.4 Western Blot檢測cleaved caspase-3/PARP蛋白的表達(dá)水平
        2.2.5 共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化
        2.2.6 流失細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化
第三章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]可共載化療藥物和基因以協(xié)同增強(qiáng)其抗腫瘤功效的葉酸修飾兩親性殼聚糖納米載體[D]. 余波杰.復(fù)旦大學(xué) 2014



本文編號：3658298