目的:PD-1/PD-L1是目前抗癌藥物研發(fā)的明星靶點(diǎn),截止到2018年3月,全球已經(jīng)有5個(gè)抗PD-1/PD-L1的抗體藥物上市,并取得了良好的臨床療效。靶向該通路的抗體藥物通過阻斷PD-1/PD-L1的結(jié)合,消除PD-1蛋白對(duì)抗原呈遞信號(hào)的負(fù)向調(diào)控作用,恢復(fù)T細(xì)胞對(duì)PD-L1過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的識(shí)別殺傷能力,達(dá)到克服腫瘤免疫逃逸的目的。正常情況下PD-1胞外域接受配體提供的信號(hào),負(fù)向調(diào)控T細(xì)胞的活化與增殖,避免T細(xì)胞過度活化導(dǎo)致的自身免疫性疾病。但該通路被PD-L1過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞利用后,會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。針對(duì)該通路的特點(diǎn),本課題靶向PD-1與PD-L1結(jié)合的配體界面區(qū)設(shè)計(jì)了一種高親和力的納米抗體,通過阻斷PD-1胞外域與PD-L1的結(jié)合,恢復(fù)T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。方法:1.噬菌體展示技術(shù)淘篩高親和力抗體通過生物信息學(xué)的手段,模擬PD-1與PD-L1的結(jié)合,確定胞外域與配體結(jié)合界面的氨基酸序列,并人工合成該段序列。從商用人單域抗體噬菌體展示庫中經(jīng)多輪ELISA淘篩獲取對(duì)結(jié)合界面的高親和力單域抗體。通過測(cè)序獲得DNA序列后,翻譯獲得其氨基酸序列。2.單域抗體的真核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

淘篩流程圖

人PD-1蛋白3D結(jié)構(gòu)模擬

KM13的胰蛋白酶處理結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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