目的:PD-1/PD-L1是目前抗癌藥物研發(fā)的明星靶點,截止到2018年3月,全球已經(jīng)有5個抗PD-1/PD-L1的抗體藥物上市,并取得了良好的臨床療效。靶向該通路的抗體藥物通過阻斷PD-1/PD-L1的結(jié)合,消除PD-1蛋白對抗原呈遞信號的負(fù)向調(diào)控作用,恢復(fù)T細(xì)胞對PD-L1過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的識別殺傷能力,達(dá)到克服腫瘤免疫逃逸的目的。正常情況下PD-1胞外域接受配體提供的信號,負(fù)向調(diào)控T細(xì)胞的活化與增殖,避免T細(xì)胞過度活化導(dǎo)致的自身免疫性疾病。但該通路被PD-L1過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞利用后,會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。針對該通路的特點,本課題靶向PD-1與PD-L1結(jié)合的配體界面區(qū)設(shè)計了一種高親和力的納米抗體,通過阻斷PD-1胞外域與PD-L1的結(jié)合,恢復(fù)T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。方法:1.噬菌體展示技術(shù)淘篩高親和力抗體通過生物信息學(xué)的手段,模擬PD-1與PD-L1的結(jié)合,確定胞外域與配體結(jié)合界面的氨基酸序列,并人工合成該段序列。從商用人單域抗體噬菌體展示庫中經(jīng)多輪ELISA淘篩獲取對結(jié)合界面的高親和力單域抗體。通過測序獲得DNA序列后,翻譯獲得其氨基酸序列。2.單域抗體的真核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

淘篩流程圖

人PD-1蛋白3D結(jié)構(gòu)模擬

KM13的胰蛋白酶處理結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗PD-1/PD-L1抗體藥物的全球市場規(guī)模影響因素分析及市場預(yù)測[J]. 周峰,吳騁.  中國新藥雜志. 2018(06)
[2]抗體庫技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 李書成,韓寧,李翀.  醫(yī)學(xué)綜述. 2018(02)
[3]PD-1/PD-L1/PD-L2小分子抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 謝永麗,丁寄葳,岑山,周金明.  中國醫(yī)藥生物技術(shù). 2017(05)
[4]免疫檢查點PD-1/PD-L1抑制劑的研究概況[J]. 武怡舟,孫宏斌.  藥學(xué)與臨床研究. 2017(04)
[5]PD-1/PD-L1信號通路抗腫瘤抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 李圣男,周子筠,姜珊,陳燁.  中國藥物化學(xué)雜志. 2017(03)
[6]噬菌體展示技術(shù)在抗體藥物研發(fā)中的應(yīng)用[J]. 徐夢龍,譚樹華.  黑龍江科技信息. 2017(13)
[7]畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)發(fā)展概況及趨勢[J]. 朱泰承,李寅.  生物工程學(xué)報. 2015(06)
[8]不同信號肽對畢赤酵母表達(dá)漆酶的影響[J]. 石藝平,周雪,胡美榮,林劍輝,陶勇,黃建忠.  微生物學(xué)報. 2014(12)
[9]噬菌體展示納米抗體模擬黃曲霉毒素抗原的活性表征[J]. 王妍入,李培武,張奇,丁小霞,張文.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(04)
[10]單克隆抗體制備技術(shù)的改進(jìn)[J]. 李麗英.  內(nèi)江科技. 2013(02)



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