本文關(guān)鍵詞：胃癌來源Exosomes活化的巨噬細胞在胃癌發(fā)展中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探究胃癌來源的外泌體exosomes通過對巨噬細胞的調(diào)節(jié)促進胃癌發(fā)展的作用及機制,為揭示exosomes通過作用巨噬細胞改變胃癌微環(huán)境促進胃癌的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)與實驗支撐。方法:運用超速離心法從正常胃上皮細胞(GES-1)以及胃癌細胞(MGC-803,SGC-7901)培養(yǎng)上清中提取exosomes,并通過透射電鏡、Nanosight技術(shù)及Western-blot分析分別對exosomes的形態(tài)、數(shù)目與表面標記進行鑒定;運用流式細胞成像技術(shù)及高內(nèi)涵熒光顯微鏡觀察exosomes被巨噬細胞內(nèi)化的現(xiàn)象;通過細胞劃痕實驗,細胞遷移實驗,細胞克隆實驗,細胞侵襲實驗及細胞凋亡檢測探究exosomes作用的巨噬細胞上清對胃癌細胞的影響;Western blot檢測exosomes作用后的單核巨噬細胞中NF-κB通路的活化情況;使用小分子抑制劑Bay11-7082阻斷巨噬細胞中NF-κB通路的活化;q RT-PCR與ELISA檢測exosomes作用后的單核巨噬細胞炎癥因子的表達變化。結(jié)果:從胃癌上皮細胞株及胃癌細胞株培養(yǎng)上清中成功分離出的exosomes呈現(xiàn)50-100納米左右的囊泡狀,粒子濃度約為1.0×1011/ml到2.5×1011/ml,exosomes表面蛋白標記CD9、CD81為陽性。流式成像檢測與高內(nèi)涵熒光顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn),巨噬細胞能夠成功地吞噬熒光標記的胃癌細胞來源exosomes。胃癌細胞經(jīng)MGC-803以及SGC-7901來源的exosomes處理的巨噬細胞上清作用后,其遷移能力與細胞克隆形成能力較對照組明顯增強;胃癌細胞來源的exosomes處理巨噬細胞后其上清具有促進MGC-803以及SGC-7901細胞侵襲的功能;而經(jīng)胃癌細胞來源的exosomes處理的巨噬細胞上清對胃癌細胞的凋亡能力改變無明顯作用。胃癌細胞MGC-803以及SGC-7901細胞來源的exosomes作用巨噬細胞后NF-κB通路活化,P-P65表達上調(diào),定量以及ELISA檢測IL-6、TNF-α、CCL2基因以及蛋白水平的表達與對照組相比明顯上調(diào)。使用NF-κB通路抑制劑Bay11-7082預(yù)處理THP-1細胞后,胃癌exosomes對單核細胞NF-κB通路活化能力受到抑制,炎癥因子IL-6、TNF-α、CCL2的表達亦明顯下調(diào),其上清對胃癌的生物學功能無明顯改變。應(yīng)用人外周血巨噬細胞的實驗表明,MGC-803來源的exosomes能夠活化NF-κB通路,上調(diào)炎癥因子的表達,促進胃癌細胞的遷移能力,細胞克隆能力與細胞的侵襲能力。結(jié)論:胃癌來源的exosomes通過作用腫瘤微環(huán)境中的巨噬細胞促進胃癌的進程。本研究揭示了exosomes在胃癌微環(huán)境中的新作用,為全面認識exosomes在胃癌進程中的作用提供了新的證據(jù),同時也為胃癌的臨床治療提供了新的治療思路。
【關(guān)鍵詞】：Exosomes 巨噬細胞 微環(huán)境 NF-κB 胃癌
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 緒論15-21
• 1.1 人胃癌細胞分泌的Exosomes15-16
• 1.1.1 Exosomes的生物學特性15-16
• 1.1.2 Exosomes的分離與純化16
• 1.2 胃癌Exosomes與腫瘤微環(huán)境16-19
• 1.2.1 腫瘤微環(huán)境的構(gòu)成17
• 1.2.2 Exosomes對腫瘤的作用17-18
• 1.2.3 胃癌與NF-κB信號通路18-19
• 1.3 巨噬細胞在胃癌發(fā)展中的作用19-21
• 1.3.1 巨噬細胞的特性19
• 1.3.2 巨噬細胞與腫瘤的關(guān)系19-21
• 第二章 研究目的、方法、實驗設(shè)計方案和意義21-24
• 2.1 研究目的21
• 2.2 研究方法21-22
• 2.3 實驗設(shè)計方案22-23
• 2.4 研究意義23-24
• 第三章 Exosomes的分離與鑒定24-30
• 3.1 材料與儀器24-25
• 3.1.1 主要材料24-25
• 3.1.2 主要儀器25
• 3.1.3 細胞株25
• 3.2 方法25-26
• 3.2.1 細胞的培養(yǎng)及條件培養(yǎng)上清的制備25
• 3.2.2 Exosomes的分離與純化25-26
• 3.2.3 透射電鏡觀察Exosomes的形態(tài)26
• 3.2.4 納米示蹤分析儀（NTA）檢測Exosomes粒子直徑及分布26
• 3.2.5 Western blot檢測Exosomes表面標記蛋白26
• 3.3 結(jié)果26-28
• 3.3.1 Exosomes的形態(tài)特征26-27
• 3.3.2 Exosomes數(shù)目與粒徑分布27-28
• 3.3.3 Exosomes表面蛋白標記的檢測28
• 3.4 討論28-30
• 第四章 巨噬細胞對Exosomes的內(nèi)化作用30-33
• 4.1 材料與儀器30
• 4.1.1 主要材料30
• 4.1.2 主要儀器30
• 4.1.3 細胞株30
• 4.2 方法30-31
• 4.2.1 高內(nèi)涵細胞成像分析30-31
• 4.2.2 流式細胞成像分析31
• 4.3 結(jié)果31-32
• 4.3.1 巨噬細胞經(jīng)PMA誘導后形態(tài)特征31
• 4.3.2 Exosomes被單核巨噬細胞吞噬31-32
• 4.4 討論32-33
• 第五章 Exosomes活化的巨噬細胞對胃癌細胞生物學功能的影響33-40
• 5.1 材料與儀器33-34
• 5.1.1 主要材料33
• 5.1.2 主要儀器33-34
• 5.1.3 細胞株34
• 5.2 方法34-36
• 5.2.1 細胞培養(yǎng)及上清的收集34
• 5.2.2 細胞劃痕試驗34
• 5.2.3 Transwell細胞遷移試驗34-35
• 5.2.4 細胞克隆形成實驗35
• 5.2.5 細胞侵襲實驗35
• 5.2.6 細胞凋亡流式檢測35
• 5.2.7 細胞的處理與統(tǒng)計35-36
• 5.3 結(jié)果36-38
• 5.3.1 Exosomes活化的巨噬細胞促進胃癌細胞的遷移能力36-37
• 5.3.2 Exosomes活化的巨噬細胞增強胃癌細胞的克隆形成能力37
• 5.3.3 Exosomes活化的巨噬細胞促進胃癌細胞的侵襲能力37-38
• 5.3.4 Exosomes活化的巨噬細胞對胃癌細胞凋亡能力的影響38
• 5.4 討論38-40
• 第六章 胃癌細胞來源Exosomes活化巨噬細胞機制的研究40-54
• 6.1 材料與儀器40-41
• 6.1.1 主要材料40-41
• 6.1.2 主要儀器41
• 6.1.3 細胞株41
• 6.2 方法41-44
• 6.2.1 細胞的培養(yǎng)與上清的收集41-42
• 6.2.2 細胞蛋白的提取42
• 6.2.3 Western blot42
• 6.2.4 總RNA的提取與逆轉(zhuǎn)錄42-43
• 6.2.5 熒光實時定量PCR43
• 6.2.6 ELISA實驗43
• 6.2.7 人外周血單核細胞的提取與培養(yǎng)43-44
• 6.2.8 細胞劃痕實驗44
• 6.2.9 細胞遷移與侵襲實驗44
• 6.2.10 細胞克隆實驗44
• 6.2.11 數(shù)據(jù)分析44
• 6.3 結(jié)果44-52
• 6.3.1 胃癌來源Exosomes促使巨噬細胞的NF-κB磷酸化激活44-45
• 6.3.2 Bay11-7082抑制胃癌Exosomes對巨噬細胞的活化45-46
• 6.3.3 NF-κB抑制劑處理后的巨噬細胞促遷移能力減弱46-48
• 6.3.4 NF-κB抑制劑處理后的巨噬細胞促增殖與促侵襲能力減弱48-49
• 6.3.5 胃癌來源Exosomes活化外周血巨噬細胞的NF-κB通路49-50
• 6.3.6 Exosomes活化外周血巨噬細胞的NF-κB通路促進胃癌的遷移50-51
• 6.3.7 Exosomes活化外周血巨噬細胞的NF-κB通路促進胃癌的增殖與侵襲51-52
• 6.4 討論52-54
• 第七章 結(jié)論與展望54-55
• 7.1 結(jié)論54
• 7.2 展望54-55
• 參考文獻55-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及參加會議63

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 戴成雨;胃癌20例誤診分析[J];實用醫(yī)學雜志;2002年03期

2 李秋波,陶智慧,胡奎,韓智,馬勇;胃癌術(shù)前區(qū)域動脈灌注化療加手術(shù)聯(lián)合治療的療效觀察(附24例)[J];航空航天醫(yī)藥;2003年03期

3 倪海濱,毛振彪,黃介飛,肖明兵,季穎林,張彥亮,冒海蕾;血清可溶性細胞間粘附分子-1與胃癌臨床意義的研究[J];南通醫(yī)學院學報;2003年01期

4 邢亞莉;姚春霞;唐曉君;劉春梅;;彩超在胃癌診斷中的價值[J];基層醫(yī)學論壇;2007年17期

5 ;日本專家用新技術(shù)提高胃癌診斷準確率[J];生物醫(yī)學工程與臨床;2009年02期

6 ;新技術(shù)能提高胃癌診斷準確率[J];中華中醫(yī)藥學刊;2009年07期

7 高春光;;胃癌患者的臨床治療體會[J];中國民族民間醫(yī)藥;2009年14期

8 高瑞鳳;朱曄;劉興姣;;37例進展期胃癌的超聲分析[J];中國實用醫(yī)藥;2010年25期

9 姜可偉;;規(guī)范全球第二大致死率疾病的診斷——《胃癌診斷標準》解讀[J];中國衛(wèi)生標準管理;2010年04期

10 張常華;何裕隆;詹文華;吳英;;多學科小組與胃癌診治[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 武淑蘭;魏志杰;殷宇明;;胃癌致微血管病性溶血性貧血的診斷[A];第十一屆全國紅細胞疾病學術(shù)會議暨學習班論文匯編[C];2007年

2 丁濤;;超聲在診斷胃癌中的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第三屆全國肌肉骨骼超聲醫(yī)學學術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

3 陳曉康;呂國榮;蘇若瑟;;應(yīng)用彩色能量多普勒血流顯像對胃癌的診斷價值[A];慶祝中國超聲醫(yī)學工程學會成立20周年——第八屆全國超聲醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

4 于吉人;;胃癌的術(shù)前系統(tǒng)評估[A];2004年浙江省外科學學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

5 楊軍樂;寧文德;董季平;徐敏;;多層螺旋CT在胃癌診斷中的應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學會第十三屆全國放射學大會論文匯編（下冊）[C];2006年

6 張曉鵬;;胃癌磁共振成像研究進展[A];第四屆中國腫瘤學術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張麗紅;常維平;黃賢會;;螺旋CT在特殊部位胃癌診斷中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會放射醫(yī)師分會首屆會員大會暨第四屆醫(yī)學影像山東論壇、山東省第16次放射學會議暨山東省第14屆醫(yī)學影像學學術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 陳靜;;彩色多普勒超聲檢查在胃癌的應(yīng)用[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第七屆全國腹部超聲學術(shù)會議學術(shù)論文匯編[C];2007年

9 劉池波;梁勇;王海寶;楊林軍;梁津逍;;胃癌患者中血清淀粉樣蛋白A的測定及臨床意義[A];第二屆中國醫(yī)學細胞生物學學術(shù)大會暨細胞生物學教學改革會議論文集[C];2008年

10 吳厚賓;;腹腔鏡在胃癌診治中的應(yīng)用進展(綜述)[A];江西省第二屆胃腸外科學術(shù)會議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 錢錚;新技術(shù)能提高胃癌診斷準確率[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

2 記者 陳青;胃癌患者從“存活”邁向“樂活”[N];文匯報;2010年

3 李楠;胃癌診斷敏感性從不足30%提高到57.4%[N];健康報;2008年

4 通訊員 李楠;胃癌“轉(zhuǎn)化醫(yī)學”研究見成效[N];上�？萍紙�;2008年

5 記者 楚燕　通訊員 那偉 高樹灼;廈門胃癌研究達國際領(lǐng)先水平[N];廈門日報;2009年

6 胡德榮;新型胃癌分子標志物研究獲突破[N];中國醫(yī)藥報;2010年

7 本報記者 周芳;改善飲食習慣 早發(fā)現(xiàn)早治療[N];吉林日報;2006年

8 中南大學湘雅二醫(yī)院 楊燕貽;胃癌防治有哪些錯誤觀念[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

9 特約記者 程守勤;胃癌診斷又有新方法[N];家庭醫(yī)生報;2003年

10 重慶萬州 黃瓊;胃癌的手術(shù)治療[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫大志;基于microRNA 21的調(diào)控作用探討從痰論治胃癌的作用機制[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2012年

2 陳悅之;TNFAIP8在胃癌中的表達和對調(diào)節(jié)胃癌細胞增殖，影響侵襲及遷移中的作用研究[D];山東大學;2015年

3 殷繼鵬;腫瘤血管靶向肽GX1用于胃癌的分子影像研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

4 蔡習強;TFEB介導的自噬在胃癌耐藥中的作用及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

5 趙曉迪;microRNA-7調(diào)控胃癌惡性生物學行為的功能與分子機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

6 尚華;MicroRNA-125a在胃癌中表達水平的研究及其臨床意義[D];山東大學;2015年

7 關(guān)中正;TGF-β在胃癌免疫逃逸中作用及機制研究[D];山東大學;2015年

8 黃勇;AEG-1/MT qDH、NF-κB、MMP-9在胃癌中的表達及相關(guān)性的研究[D];山東大學;2015年

9 謝黎明;胃癌中miR-124表達的意義及作用機制研究[D];南華大學;2015年

10 劉佳寧;SOX9和CEACAM1在胃癌組織中表達及其對胃癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐海蓉;胃癌危險因素的流行病學研究[D];南京醫(yī)科大學;2002年

2 張軍利;p27、PTEN與VEGF蛋白在胃癌組織中的表達及其意義[D];泰山醫(yī)學院;2014年

3 馬春婷;胃癌與幽門螺桿菌的相關(guān)性研究[D];石河子大學;2015年

4 王士杰;腹腔鏡手術(shù)治療進展期遠端胃癌的臨床療效及患者術(shù)后隨訪生存質(zhì)量研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

5 李浩;胃癌血清蛋白標記物的篩選與鑒定[D];鄭州大學;2015年

6 王巍;胃癌患者血液樣品的光譜分析[D];鄭州大學;2015年

7 李玉博;高場磁共振在胃癌術(shù)前T分期與分級的價值[D];鄭州大學;2015年

8 張?zhí)K鈺;SOX4和P53蛋白在胃癌組織中的表達及貞芪扶正膠囊對胃癌術(shù)后輔助治療作用的觀察[D];蘭州大學;2015年

9 馬來陽;能譜CT成像在胃癌術(shù)前分期及分化程度評價中的應(yīng)用研究[D];蘭州大學;2015年

10 侯向紅;HORMAD2在胃癌中的表達及對胃癌細胞增殖和凋亡的影響[D];蘭州大學;2015年

  本文關(guān)鍵詞：胃癌來源Exosomes活化的巨噬細胞在胃癌發(fā)展中的作用及機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：363213