【目的】探討乙酰輔酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表達(dá)改變對(duì)食管鱗癌細(xì)順鉑（cisplatin,DDP）敏感性的影響和相關(guān)機(jī)制�！痉椒ā浚�1）通過免疫組化和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)40對(duì)食管鱗癌瘤體及癌旁組織中ACSS2的表達(dá)水平;蛋白質(zhì)印跡法驗(yàn)證食管鱗癌細(xì)胞株與食管鱗狀正常Het-1A細(xì)胞中ACSS2表達(dá)差異;（2）利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA-ACSS2、陰性對(duì)照siRNA-NC或者慢病毒轉(zhuǎn)染LV-ACSS2至TE-1細(xì)胞構(gòu)建ACSS2下調(diào)或過表達(dá)細(xì)胞株;CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)ACSS2對(duì)順鉑IC50值的改變;（3）順鉑處理（5μg/mL）前后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ACSS2干擾處理對(duì)TE-1細(xì)胞凋亡水平的影響;（4）蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)PI3K/AKT信號(hào)通路及凋亡相關(guān)蛋白cleaved-Caspase-3的表達(dá)變化�！窘Y(jié)果】（1）免疫組化結(jié)果顯免疫組化及蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示食管鱗癌組織中ACSS2蛋白表達(dá)強(qiáng)度要顯著高于癌旁正常組織（P<0.001）;食管鱗癌細(xì)胞株中ACSS2表達(dá)水平要明顯高于正常鱗狀上皮細(xì)胞Het-1A;（2）CCK8結(jié)果顯示siRNA-A... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

食管鱗癌和正常組織中ACSS2表達(dá)水平Fig1.1TheexpressionlevelsofACSS2inESCCtumorsandadjacentnormaltissues.

ACSS2通過PI3K/AKT信號(hào)通路參與食管鱗癌細(xì)胞的順鉑敏感性調(diào)控18表1.1組織樣本中ACSS2總分分級(jí)Table1.TheexpressionlevelsofACSS2intissuesamples.食管鱗癌組織癌旁正常組織合計(jì)-+++-1001+106420++59519合計(jì)16159401.3.2食管鱗癌細(xì)胞及正常人食管鱗狀上皮細(xì)胞中ACSS2表達(dá)水平通過qRT-PCR和Westernblot分析檢測(cè)了不同食管鱗癌細(xì)胞系當(dāng)中以及正常人食管鱗狀上皮細(xì)胞ACSS2的表達(dá)水平（圖12）。通過與正常人食管鱗狀上皮細(xì)胞(Het-1A)細(xì)胞對(duì)比發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌細(xì)胞TE-1、ECA-109及KYSE-150均有較強(qiáng)的ACSS2表達(dá)，并且在三株食管鱗癌細(xì)胞系當(dāng)中，ACSS2在TE-1細(xì)胞系當(dāng)中表達(dá)最為顯著。在接下來(lái)的功能實(shí)驗(yàn)當(dāng)中我們選取ACSS2表達(dá)較強(qiáng)的TE-1細(xì)胞作為主要研究對(duì)象。圖1.2熒光定量PCR及免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞及正常人食管鱗狀上皮細(xì)胞中ACSS2表達(dá)強(qiáng)度Fig1.2DetectACSS2expressionintensityinesophagealsquamouscellcarcinomacellsandnormalesophagealsquamouscellcellsbyRT-PCRandWB注：*P<0.05，**P<0.01

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文27沿著每孔的孔壁緩慢加入，加樣完成后放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)等待2h；（7）關(guān)閉燈光拉上窗簾，將96孔板卡在酶標(biāo)儀工作區(qū)中，打開電腦軟件，設(shè)置波長(zhǎng)為450nm測(cè)定每孔的OD值，按公式計(jì)算出生長(zhǎng)活力值及IC50值。收集數(shù)據(jù)，軟件分析繪圖。2.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析同第一章2.3結(jié)果2.3.1食管鱗癌細(xì)胞中不同siRNA-ACSS2轉(zhuǎn)染效果比較為了進(jìn)一步探究食管鱗癌細(xì)胞中異常活化表達(dá)的ACSS2是否在食管癌化療敏感性調(diào)控中發(fā)揮作用，首先通過Westernblot法對(duì)3組siRNA干擾效果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)其中siRNA-ACSS2-#3效果最好，siRNA-ACSS2-#1和#2的效果較為一致且均弱于#3（圖21）。我們選取干擾效果較好#3和次之的#1進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。圖2.1不同siRNA-ACSS2處理效果Fig2.1DifferentsiRNA-ACSS2TreatmentEffects2.3.2ACSS2下調(diào)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞中順鉑IC50值的影響對(duì)TE-1細(xì)胞分別干擾ACSS2或者NC處理后采用梯度濃度的DDP處理24h后證實(shí)，相同濃度的DDP條件下除12.5μg/mL濃度以外，siRNA-ACSS2-#3處理組的食管鱗癌細(xì)胞活力在除12.5μg/mL濃度以外下降幅度較對(duì)照組、陰性對(duì)照組均有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（25、50μg/mL，p<0.05；3.125、6.25μg/mL，p<0.001）；siRNA-ACSS2-#1處理組的食管鱗癌細(xì)胞活力在50、25、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CCGD-ESCC: A Comprehensive Database for Genetic Variants Associated with Esophageal Squamous Cell Carcinoma in Chinese Population[J]. Linna Peng,Sijin Cheng,Yuan Lin,Qionghua Cui,Yingying Luo,Jiahui Chu,Mingming Shao,Wenyi Fan,Yamei Chen,Ai Lin,Yiyi Xi,Yanxia Sun,Lei Zhang,Chao Zhang,Wen Tan,Ge Gao,Chen Wu,Dongxin Lin.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2018(04)
[2]江蘇省揚(yáng)中市1991～2012年食管癌流行趨勢(shì)分析[J]. 仝海員,華召來(lái).  中國(guó)腫瘤. 2017(02)
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本文編號(hào)：3615912