【目的】探討乙酰輔酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表達改變對食管鱗癌細順鉑（cisplatin,DDP）敏感性的影響和相關機制。【方法】（1）通過免疫組化和蛋白質(zhì)印跡法檢測40對食管鱗癌瘤體及癌旁組織中ACSS2的表達水平;蛋白質(zhì)印跡法驗證食管鱗癌細胞株與食管鱗狀正常Het-1A細胞中ACSS2表達差異;（2）利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染siRNA-ACSS2、陰性對照siRNA-NC或者慢病毒轉(zhuǎn)染LV-ACSS2至TE-1細胞構(gòu)建ACSS2下調(diào)或過表達細胞株;CCK8實驗檢測下調(diào)ACSS2對順鉑IC50值的改變;（3）順鉑處理（5μg/mL）前后,流式細胞術檢測ACSS2干擾處理對TE-1細胞凋亡水平的影響;（4）蛋白質(zhì)印跡檢測PI3K/AKT信號通路及凋亡相關蛋白cleaved-Caspase-3的表達變化�！窘Y(jié)果】（1）免疫組化結(jié)果顯免疫組化及蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示食管鱗癌組織中ACSS2蛋白表達強度要顯著高于癌旁正常組織（P<0.001）;食管鱗癌細胞株中ACSS2表達水平要明顯高于正常鱗狀上皮細胞Het-1A;（2）CCK8結(jié)果顯示siRNA-A... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

食管鱗癌和正常組織中ACSS2表達水平Fig1.1TheexpressionlevelsofACSS2inESCCtumorsandadjacentnormaltissues.

ACSS2通過PI3K/AKT信號通路參與食管鱗癌細胞的順鉑敏感性調(diào)控18表1.1組織樣本中ACSS2總分分級Table1.TheexpressionlevelsofACSS2intissuesamples.食管鱗癌組織癌旁正常組織合計-+++-1001+106420++59519合計16159401.3.2食管鱗癌細胞及正常人食管鱗狀上皮細胞中ACSS2表達水平通過qRT-PCR和Westernblot分析檢測了不同食管鱗癌細胞系當中以及正常人食管鱗狀上皮細胞ACSS2的表達水平（圖12）。通過與正常人食管鱗狀上皮細胞(Het-1A)細胞對比發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌細胞TE-1、ECA-109及KYSE-150均有較強的ACSS2表達，并且在三株食管鱗癌細胞系當中，ACSS2在TE-1細胞系當中表達最為顯著。在接下來的功能實驗當中我們選取ACSS2表達較強的TE-1細胞作為主要研究對象。圖1.2熒光定量PCR及免疫印跡實驗檢測食管鱗癌細胞及正常人食管鱗狀上皮細胞中ACSS2表達強度Fig1.2DetectACSS2expressionintensityinesophagealsquamouscellcarcinomacellsandnormalesophagealsquamouscellcellsbyRT-PCRandWB注：*P<0.05，**P<0.01

江蘇大學碩士學位論文27沿著每孔的孔壁緩慢加入，加樣完成后放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)等待2h；（7）關閉燈光拉上窗簾，將96孔板卡在酶標儀工作區(qū)中，打開電腦軟件，設置波長為450nm測定每孔的OD值，按公式計算出生長活力值及IC50值。收集數(shù)據(jù)，軟件分析繪圖。2.2.6統(tǒng)計學分析同第一章2.3結(jié)果2.3.1食管鱗癌細胞中不同siRNA-ACSS2轉(zhuǎn)染效果比較為了進一步探究食管鱗癌細胞中異�；罨磉_的ACSS2是否在食管癌化療敏感性調(diào)控中發(fā)揮作用，首先通過Westernblot法對3組siRNA干擾效果進行對比，發(fā)現(xiàn)其中siRNA-ACSS2-#3效果最好，siRNA-ACSS2-#1和#2的效果較為一致且均弱于#3（圖21）。我們選取干擾效果較好#3和次之的#1進行下一步實驗。圖2.1不同siRNA-ACSS2處理效果Fig2.1DifferentsiRNA-ACSS2TreatmentEffects2.3.2ACSS2下調(diào)對食管鱗癌細胞中順鉑IC50值的影響對TE-1細胞分別干擾ACSS2或者NC處理后采用梯度濃度的DDP處理24h后證實，相同濃度的DDP條件下除12.5μg/mL濃度以外，siRNA-ACSS2-#3處理組的食管鱗癌細胞活力在除12.5μg/mL濃度以外下降幅度較對照組、陰性對照組均有顯著差異，具有統(tǒng)計學意義（25、50μg/mL，p<0.05；3.125、6.25μg/mL，p<0.001）；siRNA-ACSS2-#1處理組的食管鱗癌細胞活力在50、25、

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3615912