STIM1是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的跨膜蛋白,它能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,維持鈣離子穩(wěn)態(tài)。細(xì)胞內(nèi)鈣離子通過不同信號通路在多個(gè)環(huán)節(jié)影響著腫瘤的分化、增殖、凋亡、遷移等STIM1是細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵的鈣離子感受器,它與腫瘤的關(guān)系受到廣泛關(guān)注。文獻(xiàn)報(bào)道,STIM1在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá),如乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌等。目前,尚未見STIM1與胃癌有關(guān)的報(bào)道,且關(guān)于STIM1對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響的觀點(diǎn)存在較大分歧。目的本課題以胃癌為研究對象,探究STIM1在胃癌中的表達(dá),STIM1對胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲能力的影響,并初步探討其機(jī)制。方法（1）Western Blot檢測MKN45、SGC7901、AGS、NCI-N87四種胃癌細(xì)胞株中STIM1表達(dá)情況。（2）si RNA干擾下調(diào)胃癌細(xì)胞中STIM1表達(dá),Western Blot與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測干擾效率。（3）CCK8檢測細(xì)胞增殖。（4）Annexin V-FITC/PI雙染流式檢測細(xì)胞凋亡。（5）細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測STIM1對胃癌細(xì)胞粘附、遷移、侵襲能力的影響。（6）Western Blot檢測STIM1功能... 

【文章來源】：成都醫(yī)學(xué)院四川省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

WesternBlot檢測四種胃癌細(xì)胞中STIM1的表達(dá)情況

圖 3-2 STIM1-siRNA 轉(zhuǎn)染后的干擾效率Figure 3-2 The interference efficiency of STIM1-siRNA Transfection注：A 圖表示 Wesrern Blot 檢測 MKN45 細(xì)胞中 STIM1 分子干擾效率；B 圖表示為三組細(xì)胞中STIM1 蛋白相對含量；C 圖為熒光定量 PCR 檢測三組細(xì)胞中 STIM1-mRNA 相對含量。所有數(shù)值均由 x s表示（n=3），*表示與 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示與 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 對胃癌細(xì)胞增殖無影響CCK8 可與活細(xì)胞反應(yīng)生成可溶的黃色物質(zhì)，活細(xì)胞的數(shù)目與此黃色物質(zhì)的數(shù)量成正比，黃色物質(zhì)在波長430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶標(biāo)儀在450nM波長處測定此溶液的 OD 值可反映溶液中活細(xì)胞數(shù)量。本實(shí)驗(yàn)將 SGC7901、MKN45兩種細(xì)胞分別分為 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三組，STIM1 siRNA組轉(zhuǎn)染 STIM1 特異性 siRNA，Control siRNA 組轉(zhuǎn)染陰性對照 siRNA。用 CCK8試劑盒檢測兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 12 小時(shí)、24 小時(shí)、48 小時(shí)后細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目。由圖 3-3

注：A 圖表示 Wesrern Blot 檢測 MKN45 細(xì)胞中 STIM1 分子干擾效率；B 圖表示為三組細(xì)胞中STIM1 蛋白相對含量；C 圖為熒光定量 PCR 檢測三組細(xì)胞中 STIM1-mRNA 相對含量。所有數(shù)值均由 x s表示（n=3），*表示與 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示與 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 對胃癌細(xì)胞增殖無影響CCK8 可與活細(xì)胞反應(yīng)生成可溶的黃色物質(zhì)，活細(xì)胞的數(shù)目與此黃色物質(zhì)的數(shù)量成正比，黃色物質(zhì)在波長430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶標(biāo)儀在450nM波長處測定此溶液的 OD 值可反映溶液中活細(xì)胞數(shù)量。本實(shí)驗(yàn)將 SGC7901、MKN45兩種細(xì)胞分別分為 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三組，STIM1 siRNA組轉(zhuǎn)染 STIM1 特異性 siRNA，Control siRNA 組轉(zhuǎn)染陰性對照 siRNA。用 CCK8試劑盒檢測兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 12 小時(shí)、24 小時(shí)、48 小時(shí)后細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目。由圖 3-3可以看出在 SGC7901 和 MKN45 干擾 12 小時(shí)、24 小時(shí)、48 小時(shí)后干擾組細(xì)胞 OD值與對照組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

【參考文獻(xiàn)】：
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