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甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)錄組和蛋白組學(xué)分析及HLA表位預(yù)測

發(fā)布時間:2022-01-23 08:57
  目的:聯(lián)合轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)和質(zhì)譜分析(MS)分析基因和蛋白的差異表達情況,通過HLA I等位基因檢測結(jié)合RNA-seq的基因變異、融合基因結(jié)果預(yù)測并篩選潛在的腫瘤新抗原或抗原表位,為了解甲狀腺癌的生物學(xué)行為和免疫因素在甲狀腺癌發(fā)生、進展與診治中的作用提供實驗基礎(chǔ)。方法:選取收集病理確診為PTC的10例患者的癌組織及相應(yīng)甲狀腺組織進行RNA提取、文庫構(gòu)建、后在Ilumina Hiseq平臺上進行轉(zhuǎn)錄組測序,測序結(jié)果通過生物信息學(xué)分析出基因變異、融合基因、基因表達量及差異表達情況。對17例PTC患者的癌組織與甲狀腺組織進行全蛋白提取、酶解消化、加入重標肽段,后進行數(shù)據(jù)非依賴采集(DIA)法質(zhì)譜分析,分析蛋白的表達情況。結(jié)合RNA-seq和MS結(jié)果,對40例PTC患者的癌組織及相應(yīng)甲狀腺組織進行ANXA1、FN1、PROS1、RAB27A、ETHE1以及COX7A2免疫組化染色和統(tǒng)計分析。通過PCR-SSP檢測法、HLAprofiler和OPtiType分析RNA-seq數(shù)據(jù)得出HLA I等位基因分型,結(jié)合RNA-seq所得基因變異、融合基因結(jié)果,主要通過pVACtools軟件以... 

【文章來源】:天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】:113 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)錄組和蛋白組學(xué)分析及HLA表位預(yù)測


所有生殖系變異SNP和體細胞突變SNV進行SIFT和PolyPhen功能預(yù)測情況

統(tǒng)計圖,基因表達水平,統(tǒng)計圖,基因表達


22圖 1.2 基因表達水平統(tǒng)計圖。該圖中,橫軸為樣品名稱,縱軸為 log10FPKM,每個區(qū)域的箱線圖對應(yīng)五個統(tǒng)計量(自上而下分別為最大值,上四分位數(shù),中值,下四分位數(shù)和最小值),兩端實心點表示異常值。由圖可知,各樣品基因表達水平集中區(qū)間、分布趨勢差別不大。1.2.7 差異表達基因檢測結(jié)果以 DEseq2 方法將各樣品基因表達水平進行各分組之間的基因差異表達(DEG)分析。差異表達基因定義為 log2FoldChange≥1 或者≤-1,且 Padj≤0.05。Fold Change(FC)為一個基因表達量除以另一基因表達量所得 的值,log2FoldChange≥1 表示前者較后者基因表達上調(diào),≤-1 表示前者較后者基因表達下調(diào)。Padj 為經(jīng)某種統(tǒng)計方法校正過的 P 值,比后者更為嚴謹、可靠。所有樣品

癌組織,火山,倍數(shù),表達者


23圖 1.3 所有樣品癌組織比癌旁組織的差異基因表達情況的火山圖,橫軸代表 log2差異倍數(shù)值,縱軸代表-log10 轉(zhuǎn)換后的顯著性值。以|log2FoldChange|≥1, Padj≤0.0表達標準,紅色代表相對于甲狀腺組織,癌組織上調(diào)的 DEG,藍色代表下調(diào)的 DE代表非 DEG。共對 22572 個基因進行了差異表達分析,圖中可見癌組織比癌旁組基因有 1464 個,低表達者有 2276 個,表達無明顯異常者占 18832 個。Padj≤0.05 的標準下,當差異表達標準為|log2FoldChange|≥2 時,癌組調(diào)表達基因 659 個,下調(diào)表達者 873 個,總差異表達基因為 1532 個;當達標準為|log2FoldChange|≥4 時,癌組織中上調(diào)表達基因 136 個,下調(diào)表個,總差異表達基因為 203 個;當差異表達標準為|log2FoldChange|≥6 時織中上調(diào)表達基因 32 個,下調(diào)表達者 2 個,總差異表達基因為 34 個;當達標準為|log2FoldChange|≥7 時,癌組織中上調(diào)表達基因 9 個,下調(diào)表達者總差異表達基因為 10 個。表 1.9 列出基因表達上調(diào)最顯著的 10 個基因(5 個未知基因未列出)。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]Differential expression of Rab27A/B correlates with clinical outcome in hepatocellular carcinoma[J]. Wei-Wei Dong,Wen-Hua Xiao,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,the General Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Beijing 100048,China Quan Mou,Jian Chen,Department of surgery,252 Hospital of Chinese People’s Liberation Army,Baoding 071000,Hebei Province,China Jian-Tao Cui,Wen-Mei Li,Laboratory of Molecular Oncology,Peking University Cancer Hospital/Institute,Beijing 100142,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(15)



本文編號:3604019

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