目的t（9;22）（q34;q11）導(dǎo)致Abl基因和Bcr基因發(fā)生融合,產(chǎn)生的BCR/ABL融合蛋白是慢性髓細胞白血病（CML）的發(fā)病原因,該蛋白主要定位在細胞漿中,其強烈的非受體酪氨酸激酶活性可通過激活下游多條信號通路促進血細胞惡性轉(zhuǎn)化。采用將BCR/ABL蛋白誘導(dǎo)入核策略,可增加CML細胞凋亡。因此,進一步研究BCR/ABL蛋白在細胞內(nèi)定位的機制具有重要意義。FABD結(jié)構(gòu)域（F-actin binding domain,FABD）是位于BCR/ABL蛋白上ABL端的大片段非催化結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域可與細胞骨架蛋白F-actin相互結(jié)合,從而影響蛋白細胞定位。如果將c-Abl蛋白上FABD結(jié)構(gòu)域缺失（以ΔFABD表示）,部分c-ABL-ΔFABD蛋白明顯入核。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),FABD結(jié)構(gòu)域缺失后BCR/ABL蛋白（以BCR/ABL-ΔFABD）不入核,其仍然滯留于胞漿中呈顆粒狀分布,其機制尚不明確。因此,本課題擬以無BCR/ABL表達的293T細胞為研究模型,進一步探討FABD結(jié)構(gòu)域缺失對BCR/ABL蛋白在細胞內(nèi)定位的影響機制。方法第一部分實驗首先用前期構(gòu)建的野生型腺病毒質(zhì)粒pA... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

六BD結(jié)構(gòu)域缺失對」l二RIABL激酶活性的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文.3 BCR/ABL 激酶活性對 BCR/ABL 蛋白定位的影響將293T細胞分為BCR/ABL組、BCR/ABL+IM+LMB組以及BCR/ABABD+LMB組，分別轉(zhuǎn)染對應(yīng)的質(zhì)粒，在轉(zhuǎn)染后24h加入Imatinib處理，在結(jié)前10h各組分別加入等量的萊普霉素（LMB）。分別培養(yǎng)24h，48 h，72h后接免疫熒光實驗觀察BCR/ABL蛋白定位變化。結(jié)果顯示，BCR/ABL蛋白主于細胞漿中，隨著時間延長也并不入核。與BCR/ABL比較，當(dāng)用Imatinib（制蛋白激酶活性，加入核輸出抑制劑LMB抑制蛋白核輸出，BCR/ABL可有核，且隨時間延長入核有所增加。然而，當(dāng)缺失FABD結(jié)構(gòu)域后，同樣加入理，BCR/ABL蛋白并不入核，仍定位于胞漿中呈顆粒狀分布，并且該定位呈時間依賴性改變。（圖2.3）

BCR/ABL-ΔFABD組中的 α-Tubulin 表達顯著減少，即 α-Tubulin 與 BCR/ABL 相互結(jié)合明顯減少。(圖1.3A) 此外，免疫熒光結(jié)果顯示，在 BCR/ABL 組中，BCR/ABL 蛋白定位于胞漿中呈彌散狀分布，骨架蛋白 α-Tubulin 在胞漿中呈纖細絲網(wǎng)狀排列，部分 BCR/ABL與 α-Tubulin 蛋白定位于胞漿中的相同位置，有明顯共定位現(xiàn)象。然而，在 FABD缺失后，BCR/ABL 蛋白定位于胞漿中呈顆粒狀分布，骨架蛋白 α-Tubulin 在胞漿中呈網(wǎng)狀分布


本文編號：3601794