目的t（9;22）（q34;q11）導(dǎo)致Abl基因和Bcr基因發(fā)生融合,產(chǎn)生的BCR/ABL融合蛋白是慢性髓細(xì)胞白血�。–ML）的發(fā)病原因,該蛋白主要定位在細(xì)胞漿中,其強(qiáng)烈的非受體酪氨酸激酶活性可通過(guò)激活下游多條信號(hào)通路促進(jìn)血細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。采用將BCR/ABL蛋白誘導(dǎo)入核策略,可增加CML細(xì)胞凋亡。因此,進(jìn)一步研究BCR/ABL蛋白在細(xì)胞內(nèi)定位的機(jī)制具有重要意義。FABD結(jié)構(gòu)域（F-actin binding domain,FABD）是位于BCR/ABL蛋白上ABL端的大片段非催化結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域可與細(xì)胞骨架蛋白F-actin相互結(jié)合,從而影響蛋白細(xì)胞定位。如果將c-Abl蛋白上FABD結(jié)構(gòu)域缺失（以ΔFABD表示）,部分c-ABL-ΔFABD蛋白明顯入核。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),FABD結(jié)構(gòu)域缺失后BCR/ABL蛋白（以BCR/ABL-ΔFABD）不入核,其仍然滯留于胞漿中呈顆粒狀分布,其機(jī)制尚不明確。因此,本課題擬以無(wú)BCR/ABL表達(dá)的293T細(xì)胞為研究模型,進(jìn)一步探討FABD結(jié)構(gòu)域缺失對(duì)BCR/ABL蛋白在細(xì)胞內(nèi)定位的影響機(jī)制。方法第一部分實(shí)驗(yàn)首先用前期構(gòu)建的野生型腺病毒質(zhì)粒pA... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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六BD結(jié)構(gòu)域缺失對(duì)」l二RIABL激酶活性的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文.3 BCR/ABL 激酶活性對(duì) BCR/ABL 蛋白定位的影響將293T細(xì)胞分為BCR/ABL組、BCR/ABL+IM+LMB組以及BCR/ABABD+LMB組，分別轉(zhuǎn)染對(duì)應(yīng)的質(zhì)粒，在轉(zhuǎn)染后24h加入Imatinib處理，在結(jié)前10h各組分別加入等量的萊普霉素（LMB）。分別培養(yǎng)24h，48 h，72h后接免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察BCR/ABL蛋白定位變化。結(jié)果顯示，BCR/ABL蛋白主于細(xì)胞漿中，隨著時(shí)間延長(zhǎng)也并不入核。與BCR/ABL比較，當(dāng)用Imatinib（制蛋白激酶活性，加入核輸出抑制劑LMB抑制蛋白核輸出，BCR/ABL可有核，且隨時(shí)間延長(zhǎng)入核有所增加。然而，當(dāng)缺失FABD結(jié)構(gòu)域后，同樣加入理，BCR/ABL蛋白并不入核，仍定位于胞漿中呈顆粒狀分布，并且該定位呈時(shí)間依賴(lài)性改變。（圖2.3）

BCR/ABL-ΔFABD組中的 α-Tubulin 表達(dá)顯著減少，即 α-Tubulin 與 BCR/ABL 相互結(jié)合明顯減少。(圖1.3A) 此外，免疫熒光結(jié)果顯示，在 BCR/ABL 組中，BCR/ABL 蛋白定位于胞漿中呈彌散狀分布，骨架蛋白 α-Tubulin 在胞漿中呈纖細(xì)絲網(wǎng)狀排列，部分 BCR/ABL與 α-Tubulin 蛋白定位于胞漿中的相同位置，有明顯共定位現(xiàn)象。然而，在 FABD缺失后，BCR/ABL 蛋白定位于胞漿中呈顆粒狀分布，骨架蛋白 α-Tubulin 在胞漿中呈網(wǎng)狀分布


本文編號(hào)：3601794