本文關(guān)鍵詞：放射致鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生自噬過程PARP-1與LKB1-AMPK-mTOR通路關(guān)系及干擾該通路對(duì)放射抗拒性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景】鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一種好發(fā)于我國(guó)長(zhǎng)江以南包括廣東、廣西、湖南、福建、浙江、香港及東南亞地區(qū)的惡性上皮細(xì)胞腫瘤。由于其特殊的解剖位置,無論是早期還是局部晚期,放療是其主要治療方式。雖然經(jīng)過規(guī)范治療,使用調(diào)強(qiáng)放療為主,聯(lián)合誘導(dǎo)、同期、輔助化療及靶向藥物等增敏治療,臨床上仍有大約20%的鼻咽癌患者出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其主要原因歸為放射抗拒。因此,研究鼻咽癌放射抗拒相關(guān)基礎(chǔ)研究,為鼻咽癌的增敏治療提供新的依據(jù)。自噬作為鼻咽癌放射抗拒的重要原因之一。本課題組前期研究表明:鼻咽癌CNE-2細(xì)胞在照射后發(fā)生自噬及凋亡,且該自噬在放射致CNE-2細(xì)胞凋亡過程中起到促存活功能;放射可以誘導(dǎo)多聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶1(Poly ADP-ribose polymerase 1,PARP-1)激活并且誘導(dǎo)自噬的發(fā)生,PARP-1在自噬的上游;在鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的裸鼠移植瘤中,沉默自噬基因,能增加其放射敏感性。近年來研究表明,LKB1蛋白(liver kinase B1)-單磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)(LKB1-AMPK-m TOR)信號(hào)通路可能是自噬發(fā)生在重要通路,因此,在前期研究基礎(chǔ)上,本研究繼續(xù)探討放射致鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生自噬過程PARP-1與LKB1-AMPK-m TOR信號(hào)通路關(guān)系,并深入探討干擾PARP-1、LKB1-AMPKm TOR信號(hào)通路降低自噬活性對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射抗拒性的影響。研究?jī)?nèi)容第一部分放射致鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生自噬過程PARP-1與LKB1-AMPK-m TOR信號(hào)通路關(guān)系的探討【目的】探明在放射引起鼻咽癌CNE-2細(xì)胞自噬過程中,PARP-1是否是LKB1-AMPK-m TOR信號(hào)通路的上游信號(hào)調(diào)控點(diǎn)。(1)證明是PARP-1通過激活LKB1和AMPK,最終激活自噬;(2)確定AMPK的抑制不會(huì)影響PARP-1的激活。【方法】1.利用Western blot(Wb)技術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅱ,證明鼻咽癌細(xì)胞放射后發(fā)生自噬。2.利用Wb技術(shù)檢測(cè)放射致CNE-2細(xì)胞發(fā)生自噬過程中對(duì)PARP-1蛋白,LKB1蛋白、AMPK蛋白及m TOR下游P70S6K蛋白磷酸化狀態(tài)(p-LKB1、pAMPK及p-P70S6K)的影響;利用化學(xué)激活劑(5-Aminoimidazole-4-carboxamide 1-β-D-ribofuranoside,AICAR)激活A(yù)MPK,慢病毒介導(dǎo)的PARP-1基因沉默抑制PARP-1和化學(xué)抑制劑(Compound C)抑制AMPK后,檢測(cè)PARP-1、p-LKB1、p-AMPK、p-P70S6K及LC3-Ⅱ的表達(dá)變化。【結(jié)果】1.鼻咽癌細(xì)胞放射后自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅱ增加。2.鼻咽癌細(xì)胞放射后PARP-1、p-AMPK、LC3-Ⅱ較對(duì)照組表達(dá)增加,pP70S6K減少。3.AICAR激活A(yù)MPK,PARP-1表達(dá)不變,p-AMPK增多,p-P70S6K減少,LC3-Ⅱ增多。4.慢病毒介導(dǎo)的PARP-1基因沉默后,PARP-1、p-AMPK表達(dá)減少,pP70S6K增多,LC3-Ⅱ減少。5.抑制AMPK,PARP-1表達(dá)不變,p-AMPK減少,p-P70S6K增加,LC3-Ⅱ減少,以上各組結(jié)果比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。6.p-LKB1在各組中的表達(dá)量沒有明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而加入AMPK抑制劑Compound C后發(fā)現(xiàn)p-LKB1無表達(dá)。【結(jié)論】鼻咽癌細(xì)胞放射后發(fā)生自噬,在放射引起CNE-2細(xì)胞自噬過程中,PARP-1是AMPK-m TOR信號(hào)通路的上游信號(hào)調(diào)控點(diǎn)。第二部分干擾PARP-1-AMPK-m TOR通路對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞放射敏感性的影響【目的】探討人為干擾PARP-1-AMPK-m TOR通路下調(diào)自噬后鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的放射線敏感性變化�！痉椒ā�1.在不照射線和照射線情況下,分別利用慢病毒介導(dǎo)的PARP-1基因沉默抑制PARP-1、Compound C抑制AMPK后,采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE-2細(xì)胞的增殖情況。2.在不照射線和照射線情況下,分別利用慢病毒介導(dǎo)的PARP-1基因沉默抑制PARP-1、Compound C抑制AMPK后,采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE-2細(xì)胞的增殖情況。【結(jié)果】1.MTT結(jié)果提示在第1-5天、不照射線情況下,PARP-1基因沉默組增殖與對(duì)照組比較無明顯差別,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),Compound C組比對(duì)照組增殖減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);照射線情況下,PARP-1基因沉默組、Compound C組比對(duì)照組增值減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);照射線下加入Compound C組比不照射線加入Compound C組增殖減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在不照射線情況下,PARP-1基因組沉默組克隆形成數(shù)與對(duì)照組比較無明顯差別(p0.05),Compound C組與對(duì)照組比較克隆數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);照射線情況下,PARP-1基因沉默組、Compound C組克隆形成數(shù)比對(duì)照組減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。照射線下加入Compound C組比不照射線加入Compound C組克隆數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。【結(jié)論】干擾PARP-1、AMPK后自噬表達(dá)降低,能增加鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的放射敏感性。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 自噬 PARP-1 AMPK m TOR 鼻咽癌 自噬 MTT實(shí)驗(yàn) 克隆形成實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 摘要5-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-25
• 第一部分 放射致鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生自噬過程PARP-1 與LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)通路關(guān)系的探討25-52
• 引言25-27
• 1.1 材料27-33
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法33-44
• 1.3 結(jié)果44-49
• 1.4 討論49-52
• 第二部分 干擾PARP1AMPK-mTOR通路對(duì)鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞放射敏感性的影響52-61
• 引言52-53
• 2.1 材料53
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 2.4 結(jié)果56-59
• 2.5 討論59-61
• 附錄（主要中英文對(duì)照表）61-62
• 綜述62-69
• 參考文獻(xiàn)69-83
• 致謝83-85
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄85-86

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本文編號(hào)：360097