目的:初步探討長鏈非編碼RNA Snhg6（long noncoding RNA Snhg6,lncRNA Snhg6）對髓源性抑制細胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）分化的調(diào)控作用及其分子機制,并進一步探究其對MDSCs免疫抑制功能的作用,為靶向MDSCs的抗腫瘤免疫治療提供新的思路和靶點。方法:（1）采用免疫磁珠法分離純化小鼠脾臟來源的MDSCs,免疫磁珠聯(lián)合流式細胞術(shù)（flow cytometry,FCM）分離純化肺癌移植瘤小鼠腫瘤組織來源的MDSCs,FCM檢測細胞純度;分析Arraystar LncRNA表達譜芯片篩選出lncRNA Snhg6,實時熒光定量PCR（real time quantitative PCR,qRT-PCR）驗證lncRNA Snhg6在不同組織來源MDSCs中的表達,并利用腫瘤細胞培養(yǎng)上清（tumor cells conditioned medium,TCCM）模擬腫瘤微環(huán)境,qRT-PCR檢測TCCM處理后lncRNA Snhg6的表達水平,FCM檢測TCCM對MDSCs分化的影響。（2）體外構(gòu)建小... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MDSCs的起源和分化[11]

LncRNASnhg6調(diào)控MDSCs分化和免疫抑制功能的實驗研究8圖1.2LncRNAs的作用機制[76]Figure1.2ThemechanismofactionoflncRNAs[76]1.2.3LncRNAs在髓系細胞和淋巴細胞中的作用髓系細胞和淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的兩大類細胞，它們協(xié)同工作，啟動和增強脊椎動物的固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。非編碼RNAs種類繁多，其中microRNAs在免疫系統(tǒng)中的作用已經(jīng)得到大量的證實，lncRNAs作為非編碼RNAs中重要的一類，其調(diào)節(jié)方式以及自身組成和結(jié)構(gòu)比microRNAs更加復(fù)雜，當然在免疫細胞譜系構(gòu)建和免疫應(yīng)答中也至關(guān)重要。1.2.3.1LncRNAs與髓系細胞（MyeloidCells）Henoa-Mejia等人在短壽命的髓系細胞中鑒定出一種高選擇性表達、高保守的lncRNAMorrbid（MyeloidRNAregulatorofBim-induceddeath），其定位于細胞核中，嚴格控制中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和經(jīng)典單核細胞的生存，以響應(yīng)細胞因子IL-5、IL-13和GM-CSF等的作用。為了控制這些細胞的壽命，Morrbid促進Bcl2l11（Bim）啟動子上的PRC2復(fù)合物的富集，特異性的調(diào)控其鄰近的促凋亡基因Bcl2l11的轉(zhuǎn)錄。在這些炎癥細胞中，這種特定位點的調(diào)節(jié)機制使Morrbid可以快速控制細胞凋亡以響應(yīng)細胞外促生存信號。事實上，臨床數(shù)據(jù)表明嗜酸性粒細胞增多癥（HES）患者的Morrbid表達水平明顯高于健康人群，提示了

LncRNASnhg6調(diào)控MDSCs分化和免疫抑制功能的實驗研究10子IL-4、IL-5和IL-13共同表達于Th2細胞中，并調(diào)控這些關(guān)鍵細胞因子的表達[86]。作為重要的殺傷性T細胞，CD8+T細胞在受TCR和I型IFN刺激后也會誘導Morrbid的轉(zhuǎn)錄，而且Morrbid參與PI3K-AKT信號通路以及促凋亡因子Bcl2l11的表達負向調(diào)控CD8+T細胞的擴增以及效應(yīng)功能[87]。以上研究均強調(diào)了lncRNAs在免疫細胞特定亞群的分化/存活以及免疫失調(diào)疾病中的重要作用。圖1.3LncRNAs在髓系與淋巴細胞中的作用[88]Figure1.3TheroleoflncRNAsinmyeloidandlymphoidcells[88]1.2.4LncRNAs與MDSCs在本研究中，我們研究的對象是髓源性抑制細胞MDSCs，MDSCs已成為一種癌癥和其他病理條件下免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)器，對先天免疫和獲得性免疫反應(yīng)均有抑制作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)大量炎癥或腫瘤相關(guān)因子、表觀修飾因子、microRNAs等參與調(diào)控MDSCs的分化發(fā)育和免疫抑制功能，但是有關(guān)lncRNAs與MDSCs之間的研究還未引起廣泛的關(guān)注。Yang等人首先報導了lncRNARNCR3能夠吸附miR-185-5p釋放其靶基因

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Lewis肺癌細胞培養(yǎng)上清液通過調(diào)控糖酵解途徑增強小鼠髓源性抑制細胞的免疫抑制功能[J]. 沈花,常怡,陸薇,許化溪,王勝軍,馬潔.  細胞與分子免疫學雜志. 2019(06)
[2]HOX transcript antisense intergenic RNA represses E-cadherin expression by binding to EZH2 in gastric cancer[J]. Wen-Ming Chen,Wei-Dong Chen,Xue-Mei Jiang,Xue-Feng Jia,Hong-Mei Wang,Qiu-Jie Zhang,Yong-Qian Shu,Hai-Bo Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(33)



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