目的:原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常見惡性腫瘤,分子靶向治療被證實可顯著改善晚期肝癌患者的預后。發(fā)現(xiàn)新的腫瘤調(diào)控分子對深入解析HCC的發(fā)病機制,尋找有效的治療靶點至關重要。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白166（transmembrane protein 166,TMEM166）,在人胃癌、神經(jīng)母細胞瘤等腫瘤中具有重要的抑癌功能,主要通過影響細胞自噬和細胞凋亡發(fā)揮作用,然而TMEM166在HCC中的功能及機制尚不清楚;研究表明多種microRNA在HCC中上調(diào)參與HCC的發(fā)生發(fā)展,TMEM166在HCC中的表達下調(diào)是否受microRNA分子的調(diào)控,這一問題的解答將有助于HCC發(fā)病機制的闡明。本研究將對TMEM166在肝細胞癌中的功能和機制進行探討,并從上游micro RNA角度對其表達調(diào)控機制進行初步的解析。方法:首先通過生物信息學方法對TCGA數(shù)據(jù)庫中TMEM166在HCC中的表達和臨床意義進行相關性分析;收集30例病人樣本,通過實時熒光定量PCR（RT-qPCR）、免疫組化、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測和驗證TMEM166在HCC組織和成對癌旁組織中的表達,并... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

TMEM166在HCC的疾病進展程度和患者生存期顯著相關（A）以log2(TPM+1)分析TMEM166在369個HCC腫瘤樣本與50個正常肝組織的表達（源于

結(jié)果21圖3TMEM166在人HCC細胞系中表達降低（A）從L02細胞、QGY-7703細胞和Hccl-M3細胞中提取mRNA，用TMEM166特異性引物RT-qPCR分析TMEM166mRNA的表達。（B）分別裂解肝細胞和HCC細胞系，提取蛋白，Westernblot檢測TMEM166的蛋白表達。以GAPDH為內(nèi)參。（C）免疫熒光法檢測內(nèi)源TMEM166蛋白在肝細胞和HCC細胞系中的表達。BF代表明常標尺，100μm。（D）統(tǒng)計分析C中TMEM166蛋白表達的熒光強度。數(shù)據(jù)以三次重復實驗的平均值±標準差表示。***P<0.001

青島大學碩士學位論文224.TMEM166抑制肝癌細胞的增殖TMEM166在肝癌組織和細胞系中低表達的一致性，提示我們利用人肝癌細胞系過表達TMEM166來研究其是否具有抗腫瘤功能。選擇三種HCC細胞系Hccl-M3、Huh7、QGY-7703作為細胞模型，用Myc標簽的TMEM166質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞，24h后，用Myc標簽體染色，熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染效率約為68%（圖4A，B）。為了研究TMEM166對HCC細胞增殖的影響，我們在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703細胞中分別轉(zhuǎn)染TMEM166-Myc或Myc-tag空載體(作為對照)，1-4天的時間點分別用MTT法檢測細胞活力。結(jié)果顯示，過表達TMEM166的三種HCC細胞系的增殖能力明顯下降（P<0.01，圖4C）。這表明，TMEM166能有效抑制肝癌細胞的增殖。圖4過表達TMEM166可抑制肝癌細胞的增殖（A和B）在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703細胞轉(zhuǎn)染Myc標簽的TMEM166質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24h后，用Myc標簽抗體染色，熒光顯微鏡觀察。TMEM166-Myc在肝癌細胞中的轉(zhuǎn)染效率通過比較熒

【參考文獻】：
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