目的:本研究旨在通過對(duì)CD44v6、透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid,HA）在結(jié)直腸癌（Colorectal cancer,CRC）中表達(dá)的檢測,探究其對(duì)順鉑耐藥性的影響,并對(duì)耐藥機(jī)制做初步探索。方法:本研究共收集了66例經(jīng)病理診斷為CRC的組織標(biāo)本,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantity Real-time PCR,qRT-PCR）,蛋白印跡法（western blot,WB）和免疫組織化學(xué)（immunohischemistry,IHC）的方法檢測CD44v6的表達(dá),分析了CD44v6表達(dá)與患者臨床病理特征之間的相關(guān)性。同時(shí)培養(yǎng)CRC細(xì)胞系,在細(xì)胞系中使用qRT-PCR和western blot法檢測CD44v6的表達(dá)。研究中通過人透明質(zhì)酸酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunoassay,ELISA）來檢測HA的表達(dá);運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染CRC細(xì)胞系來敲減CD44v6基因,驗(yàn)證CD44v6與CRC耐藥之間的關(guān)系,經(jīng)過透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase,HAase）消化CRC細(xì)胞系來阻斷CD44v6和HA的結(jié)合探索CD44v6-HA復(fù)合體與CRC耐藥之間的關(guān)... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CD44v6在CRC中的表達(dá)

16A：在CA和NORMAL中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。B：在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6基因的表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。C：在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果，選擇β-actin作為內(nèi)參基因。D：在CA和NOEMAL中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。E：在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。F：在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。G：在CA和NORMAL中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。H：在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。I：在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析，內(nèi)參蛋白為GAPDH。CA，CRC組織；NORMAL，結(jié)直腸粘膜組織；HT29和RKO，CRC細(xì)胞系；NCM460，結(jié)直腸上皮細(xì)胞系。**p<0.01,***p<0.001。圖2.2CD44v6在CRC組織和結(jié)直腸粘膜組織中的表達(dá)（IHC）A：CD44v6在結(jié)直腸粘膜組織中陰性表達(dá)（×400）；B：CD44v6在CRC組織中弱陽性表達(dá)（×400）；C：CD44v6在CRC組織中陽性表達(dá)（×400）；D：CD44v6在CRC組織中強(qiáng)陽性表達(dá)（×400）。二、CD44v6與CRC患者臨床病理之間的關(guān)系由IHC結(jié)果可知，CD44v6蛋白表達(dá)與血清中的CEA、CA125有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表2.9）。由qRT-PCR結(jié)果可知，CD44v6基因表達(dá)與血清中的CEA、CA199和N分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表2.10）。無論是IHC結(jié)果，還是qRT-PCR結(jié)果，CD44v6在CRC組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤發(fā)生部位均無相關(guān)性。ABCD

21三、HA在HT-29、RKO、NCM460細(xì)胞中的分泌情況通過采用ELISA法檢測HT29、RKO、NCM460細(xì)胞中內(nèi)源性HA的表達(dá)水平，結(jié)果表明，在ELISA檢測限內(nèi)（0.05-10ng/mL），在RKO細(xì)胞中分泌HA，在HT29、NCM460細(xì)胞中未檢測出HA的表達(dá)，結(jié)果如圖2.3。圖2.3在HT29，RKO，NCM460細(xì)胞中HA的分泌通過ELISA檢測內(nèi)源性HA在HT29，RKO和NCM460細(xì)胞系中的分泌情況。結(jié)果表明，在ELISA檢測限（0.05-10ng/mL）內(nèi)，在RKO細(xì)胞中檢測到HA表達(dá)，而在HT29和NCM460細(xì)胞系中未檢測到HA表達(dá)。***p＜0.001。

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]CD44v6在人結(jié)直腸癌化療耐藥中的作用和機(jī)制及在組織中的表達(dá)研究[D]. 劉海光.南方醫(yī)科大學(xué) 2017

碩士論文
[1]條索狀透明質(zhì)酸在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)及其在腫瘤化療耐藥中的作用初探[D]. 楊婉薇.蘇州大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3590819