CD44v6和HA在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其對(duì)順鉑耐藥機(jī)制的研究
發(fā)布時(shí)間:2022-01-15 14:58
目的:本研究旨在通過對(duì)CD44v6、透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)在結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)中表達(dá)的檢測,探究其對(duì)順鉑耐藥性的影響,并對(duì)耐藥機(jī)制做初步探索。方法:本研究共收集了66例經(jīng)病理診斷為CRC的組織標(biāo)本,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantity Real-time PCR,qRT-PCR),蛋白印跡法(western blot,WB)和免疫組織化學(xué)(immunohischemistry,IHC)的方法檢測CD44v6的表達(dá),分析了CD44v6表達(dá)與患者臨床病理特征之間的相關(guān)性。同時(shí)培養(yǎng)CRC細(xì)胞系,在細(xì)胞系中使用qRT-PCR和western blot法檢測CD44v6的表達(dá)。研究中通過人透明質(zhì)酸酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunoassay,ELISA)來檢測HA的表達(dá);運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染CRC細(xì)胞系來敲減CD44v6基因,驗(yàn)證CD44v6與CRC耐藥之間的關(guān)系,經(jīng)過透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase,HAase)消化CRC細(xì)胞系來阻斷CD44v6和HA的結(jié)合探索CD44v6-HA復(fù)合體與CRC耐藥之間的關(guān)...
【文章來源】:蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:62 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
CD44v6在CRC中的表達(dá)
16A:在CA和NORMAL中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。B:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6基因的表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。C:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果,選擇β-actin作為內(nèi)參基因。D:在CA和NOEMAL中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。E:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。F:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。G:在CA和NORMAL中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。H:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。I:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析,內(nèi)參蛋白為GAPDH。CA,CRC組織;NORMAL,結(jié)直腸粘膜組織;HT29和RKO,CRC細(xì)胞系;NCM460,結(jié)直腸上皮細(xì)胞系。**p<0.01,***p<0.001。圖2.2CD44v6在CRC組織和結(jié)直腸粘膜組織中的表達(dá)(IHC)A:CD44v6在結(jié)直腸粘膜組織中陰性表達(dá)(×400);B:CD44v6在CRC組織中弱陽性表達(dá)(×400);C:CD44v6在CRC組織中陽性表達(dá)(×400);D:CD44v6在CRC組織中強(qiáng)陽性表達(dá)(×400)。二、CD44v6與CRC患者臨床病理之間的關(guān)系由IHC結(jié)果可知,CD44v6蛋白表達(dá)與血清中的CEA、CA125有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2.9)。由qRT-PCR結(jié)果可知,CD44v6基因表達(dá)與血清中的CEA、CA199和N分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2.10)。無論是IHC結(jié)果,還是qRT-PCR結(jié)果,CD44v6在CRC組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤發(fā)生部位均無相關(guān)性。ABCD
21三、HA在HT-29、RKO、NCM460細(xì)胞中的分泌情況通過采用ELISA法檢測HT29、RKO、NCM460細(xì)胞中內(nèi)源性HA的表達(dá)水平,結(jié)果表明,在ELISA檢測限內(nèi)(0.05-10ng/mL),在RKO細(xì)胞中分泌HA,在HT29、NCM460細(xì)胞中未檢測出HA的表達(dá),結(jié)果如圖2.3。圖2.3在HT29,RKO,NCM460細(xì)胞中HA的分泌通過ELISA檢測內(nèi)源性HA在HT29,RKO和NCM460細(xì)胞系中的分泌情況。結(jié)果表明,在ELISA檢測限(0.05-10ng/mL)內(nèi),在RKO細(xì)胞中檢測到HA表達(dá),而在HT29和NCM460細(xì)胞系中未檢測到HA表達(dá)。***p<0.001。
【參考文獻(xiàn)】:
博士論文
[1]CD44v6在人結(jié)直腸癌化療耐藥中的作用和機(jī)制及在組織中的表達(dá)研究[D]. 劉海光.南方醫(yī)科大學(xué) 2017
碩士論文
[1]條索狀透明質(zhì)酸在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)及其在腫瘤化療耐藥中的作用初探[D]. 楊婉薇.蘇州大學(xué) 2012
本文編號(hào):3590819
【文章來源】:蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:62 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
CD44v6在CRC中的表達(dá)
16A:在CA和NORMAL中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。B:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6基因的表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果。C:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6基因表達(dá)的qRT-PCR結(jié)果,選擇β-actin作為內(nèi)參基因。D:在CA和NOEMAL中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。E:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。F:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白表達(dá)的westernblot結(jié)果。G:在CA和NORMAL中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。H:在HT29和RKO細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析。I:在RKO和NCM460細(xì)胞中CD44v6蛋白相對(duì)表達(dá)的灰度分析,內(nèi)參蛋白為GAPDH。CA,CRC組織;NORMAL,結(jié)直腸粘膜組織;HT29和RKO,CRC細(xì)胞系;NCM460,結(jié)直腸上皮細(xì)胞系。**p<0.01,***p<0.001。圖2.2CD44v6在CRC組織和結(jié)直腸粘膜組織中的表達(dá)(IHC)A:CD44v6在結(jié)直腸粘膜組織中陰性表達(dá)(×400);B:CD44v6在CRC組織中弱陽性表達(dá)(×400);C:CD44v6在CRC組織中陽性表達(dá)(×400);D:CD44v6在CRC組織中強(qiáng)陽性表達(dá)(×400)。二、CD44v6與CRC患者臨床病理之間的關(guān)系由IHC結(jié)果可知,CD44v6蛋白表達(dá)與血清中的CEA、CA125有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2.9)。由qRT-PCR結(jié)果可知,CD44v6基因表達(dá)與血清中的CEA、CA199和N分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2.10)。無論是IHC結(jié)果,還是qRT-PCR結(jié)果,CD44v6在CRC組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、TNM分期、腫瘤分化程度、腫瘤發(fā)生部位均無相關(guān)性。ABCD
21三、HA在HT-29、RKO、NCM460細(xì)胞中的分泌情況通過采用ELISA法檢測HT29、RKO、NCM460細(xì)胞中內(nèi)源性HA的表達(dá)水平,結(jié)果表明,在ELISA檢測限內(nèi)(0.05-10ng/mL),在RKO細(xì)胞中分泌HA,在HT29、NCM460細(xì)胞中未檢測出HA的表達(dá),結(jié)果如圖2.3。圖2.3在HT29,RKO,NCM460細(xì)胞中HA的分泌通過ELISA檢測內(nèi)源性HA在HT29,RKO和NCM460細(xì)胞系中的分泌情況。結(jié)果表明,在ELISA檢測限(0.05-10ng/mL)內(nèi),在RKO細(xì)胞中檢測到HA表達(dá),而在HT29和NCM460細(xì)胞系中未檢測到HA表達(dá)。***p<0.001。
【參考文獻(xiàn)】:
博士論文
[1]CD44v6在人結(jié)直腸癌化療耐藥中的作用和機(jī)制及在組織中的表達(dá)研究[D]. 劉海光.南方醫(yī)科大學(xué) 2017
碩士論文
[1]條索狀透明質(zhì)酸在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)及其在腫瘤化療耐藥中的作用初探[D]. 楊婉薇.蘇州大學(xué) 2012
本文編號(hào):3590819
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