緊密連接（Tight junctions,TJs）蛋白CLDNs在結(jié)直腸癌等多種上皮源性的惡性腫瘤中表達(dá)異常,并通過不同的分子機(jī)制影響腫瘤的增殖能力。作為緊密連接蛋白CLDNs家族成員之一,Claudin-6（CLDN6）包含一個氨基末端、一個羧基末端和兩個胞外環(huán)結(jié)構(gòu)。CLDN6羧基末端的PDZ結(jié)合基序可與含PDZ結(jié)構(gòu)域的信號蛋白（如ZO-1等）結(jié)合,參與信號傳遞過程,從而在腫瘤細(xì)胞增殖的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。本課題組前期工作發(fā)現(xiàn),CLDN6在結(jié)直腸癌細(xì)胞中低表達(dá);過表達(dá)CLDN6顯著抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。此外,在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中,CLDN6上調(diào)p53的表達(dá)介導(dǎo)化療耐藥。同時,預(yù)實驗結(jié)果表明,在結(jié)直腸癌細(xì)胞中,CLDN6上調(diào)p53的表達(dá)。由此我們推測,CLDN6抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖與上調(diào)p53的表達(dá)有關(guān)。p53是一種抑癌基因,當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、致癌劑及突變劑等刺激時,p53蛋白與DNA結(jié)合,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用,通過激活下游靶基因p21的轉(zhuǎn)錄,阻滯細(xì)胞周期和修復(fù)DNA,若修復(fù)失敗則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而,p53突變或缺失的細(xì)胞中,由于無法修復(fù)DNA,細(xì)胞異常增殖,發(fā)展為惡性腫瘤。p... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CLDN6在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)

第3章結(jié)果19圖3.2CLDN6在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)A：CLDN6的表達(dá)B：CLDN6表達(dá)的柱狀統(tǒng)計圖*注：P＜0.05**注：P＜0.013.2CLDN6抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖能力3.2.1構(gòu)建過表達(dá)CLDN6的細(xì)胞株為了檢測CLDN6對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的作用是否與p53有關(guān)，我們選取了結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116p53+/+和HCT116p53-/-，并在細(xì)胞中構(gòu)建過表達(dá)CLDN6的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。首先，我們鑒定HCT116p53+/+和HCT116p53-/-細(xì)胞中p53的表達(dá)，HCT116p53-/-細(xì)胞中p53在mRNA和蛋白水平基本不表達(dá)（PmRNA=0.0061<0.01，P蛋白=0.0148<0.05）（圖3.3A）。隨后，將構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白的空載體質(zhì)粒和過表達(dá)CLDN6的質(zhì)粒分別與輔助質(zhì)粒（pVSVG、gag-pol和rev）共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞(圖3.3B)，收取病毒上清液感染HCT116p53+/+和HCT116p53-/-細(xì)胞。經(jīng)過嘌呤霉素穩(wěn)定篩選后，在熒光顯微鏡下采集圖像評估轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果如圖3.3C所示，細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率達(dá)90%以上。通過RT-PCR和Western-Blot鑒定CLDN6的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與空載組相比，過表達(dá)CLDN6組中CLDN6的表達(dá)在mRNA和蛋白水平上明顯增加（HCT116p53+/+細(xì)胞PmRNA=0.0002<0.001，P蛋白=0.0140<0.05；HCT116p53-/-細(xì)胞PmRNA=0.0023<0.01，P蛋白=0.0465<0.05）（圖3.3D）。免疫熒光實驗結(jié)果顯示CLDN6主要分布于細(xì)

第3章結(jié)果20胞膜及細(xì)胞質(zhì)中（圖3.3E）。提示，成功構(gòu)建了過表達(dá)CLDN6的結(jié)直腸癌細(xì)胞株。圖3.3構(gòu)建過表達(dá)CLDN6的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株A：p53野生型及缺失型HCT116細(xì)胞株的鑒定及柱狀統(tǒng)計圖B：293T細(xì)胞中包裝過表達(dá)CLDN6的慢病毒（bar=200μm）C：HCT116細(xì)胞系病毒感染情況（bar=50μm）D：鑒定過表達(dá)CLDN6的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株E：CLDN6的亞細(xì)胞定位*注：P＜0.05**注：P＜0.01***注：P＜0.001

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Colorectal cancer screening: An updated review of the available options[J]. Iyad A Issa,Malak Noureddine.  World Journal of Gastroenterology. 2017(28)
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碩士論文
[1]CLDN6通過JAK2/STAT3信號通路抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移和侵襲[D]. 趙帥.吉林大學(xué) 2017



本文編號：3586218