目的:原發(fā)性肝癌是常見且兇險的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率位居腫瘤第五位,相關(guān)死亡率位于第三位。肝癌發(fā)生發(fā)展是多基因、多因素相互協(xié)調(diào)作用的多階段過程,其發(fā)生機制目前尚未完全闡明。因此,有必要深入研究肝癌分子生物學機制,尋找潛在的干預(yù)靶點。CFIm25是轉(zhuǎn)錄前修飾中選擇性多聚腺苷酸化的“關(guān)鍵”因子,CFIm25的抑制可顯著促進近端poly（A）位點剪切,逃逸負性調(diào)控以促進細胞增殖和轉(zhuǎn)化。目前CFIm25只在神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤等極少疾病中有所研究,在肝癌中尚無研究報道。本研究擬探討CFIm25在肝癌增殖及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及分子機制。方法:通過實時定量PCR（RT-q PCR）、蛋白免疫印跡（Western blot）及免疫組織化學（IHC）的方法檢測人肝癌及其癌旁組織中CFIm25的表達,并分析CFIm25的表達與肝癌手術(shù)病人臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系;采用小干擾RNA片段（si RNA）沉默CFIm25表達;同時使用真核過表達載體質(zhì)粒建立CFIm25過表達細胞株;通過平板克隆和CCK8實驗檢測高/低表達CFIm25后對肝癌細胞增殖能力的影響;而Transwell侵襲遷移實驗和細胞劃痕實驗用于檢測... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

選擇性多聚腺苷酸化的示意圖（圖片來源：DiGiammartino,etal.MolCell.2011;43）

圖 1、選擇性多聚腺苷酸化的示意圖（圖片來源：Di Giammartino, et al. Mol Cell.2011;43）APA 過程需要眾多因子的參與，包括剪切因子 I（CFIm）、剪切因子 II（CFIIm）、各剪切與腺苷酸化特異因子（CPSF）等。其中剪切因子 I 由 25 kD、59 kD 和 68 kD三個亞基組成，即CFIm25 (又稱CPSF5或NUDT21)，CFIm59 (又稱CPSF7)和CFIm68(也稱 CPSF6)[22-24]。有研究證據(jù)顯示，在 APA 過程中，CFIm25 發(fā)揮至關(guān)重要的 開關(guān) 作用[21]，可以顯著阻遏近端 poly(A) 位點剪切。抑制 CFIm25 的表達可誘導(dǎo)至少 1450 個基因的 3·UTR 顯著縮短，其中 64%表現(xiàn)出表達水平的顯著增加[25]。研究同時推測，CFIm25 可能是一個新的抗癌基因，其在人類腫瘤中的表達水平下降[26, 27]。

-1 RT-PCR檢測肝癌及其癌旁組織中 CFIm25 的 mRNA 表達水平（相比于癌旁組織，25 的表達更少，C：肝癌組織；N：癌旁組織，GAPDH作為內(nèi)參）。stern blot 分析人肝癌及其癌旁組織中 CFIm25蛋白的表達水平應(yīng)用 Western blot 分析人肝癌及其癌旁組織中 CFIm25 蛋白表達水平。癌組織中，我們篩選了符合組織蛋白提取要求的 35 對肝癌及其癌旁組 blot 檢測，結(jié)果顯示：23 對肝癌組織中 CFIm25 的蛋白表達水平明顯低于織（23/32,71.88%），見圖1-2。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3585082