目的:通過研究PI3K/Akt信號通路在肌醇六磷酸（inositol hexaphosphate,IP6）抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長中的作用,探討IP6誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法:1.體外培養(yǎng)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞,使用不同濃度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）進(jìn)行干預(yù),并依此濃度分組,干預(yù)24 h和48h。2.MTT法檢測不同濃度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）對結(jié)腸癌細(xì)胞分別干預(yù)24h和48h生長抑制作用效果。3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù),采用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測不同濃度IP6組對結(jié)腸癌細(xì)胞干預(yù)48h后的細(xì)胞凋亡率。4.Western-blot檢測PI3K、p Akt、Akt和caspase-9蛋白的表達(dá)情況。5.Real-time PCR檢測PI3K、Akt、caspase-9、m TOR和NF-κB m RNA的表達(dá)情況。結(jié)果:1.隨IP6干預(yù)濃度的增加和時間的延長,IP6對HT-29細(xì)胞生長的抑制作用逐漸... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第1章 材料與方法
    1.1 細(xì)胞及主要試劑
    1.2 主要儀器
    1.3 溶液配制
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        1.4.2 藥物干預(yù)
        1.4.3 實(shí)驗(yàn)分組
        1.4.4 MTT實(shí)驗(yàn)
        1.4.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡（AnnexinV-FITC/PI雙染法）
        1.4.6 蛋白樣品制備
        1.4.7 BCA法測蛋白濃度
        1.4.8 western blot
        1.4.9 實(shí)時定量PCR（Real-time PCR）方法檢細(xì)胞中mRNA的表達(dá)
            1.4.9.1 Trizol法RNA提取步驟
            1.4.9.2RNA濃度的測定
            1.4.9.3 引物的設(shè)計(jì)及合成
            1.4.9.4 反轉(zhuǎn)錄
            1.4.9.5 PCR擴(kuò)增
        1.4.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第2章 結(jié)果
    2.1 MTT比色法測定IP_6對HT-29細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用效果
    2.2 Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡
    2.3 IP_6對PI3K、Akt、pAkt、caspase-9 蛋白表達(dá)的影響
    2.4 IP_6抑制HT-29細(xì)胞PI3K、Akt、caspase-9 及mTOR mRNA的表達(dá)，上調(diào)caspase-9 及NF-κ B mRNA的表達(dá)
        2.4.1 IP_6作用后對HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞PI3K、Akt的mRNA表達(dá)的影響
        2.4.2 IP_6作用后對HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞caspase-9mRNA表達(dá)的影響
        2.4.3 IP_6作用后對HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞mTOR mRNA表達(dá)的影響
        2.4.4 IP_6作用后對HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞NF-κ B mRNA表達(dá)的影響
第3章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
縮略詞表
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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