目的:通過研究PI3K/Akt信號通路在肌醇六磷酸（inositol hexaphosphate,IP6）抑制結腸癌HT-29細胞生長中的作用,探討IP6誘導結腸癌HT-29細胞凋亡的機制。方法:1.體外培養(yǎng)結腸癌HT-29細胞,使用不同濃度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）進行干預,并依此濃度分組,干預24 h和48h。2.MTT法檢測不同濃度的IP6（0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L）對結腸癌細胞分別干預24h和48h生長抑制作用效果。3.應用流式細胞儀技術,采用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測不同濃度IP6組對結腸癌細胞干預48h后的細胞凋亡率。4.Western-blot檢測PI3K、p Akt、Akt和caspase-9蛋白的表達情況。5.Real-time PCR檢測PI3K、Akt、caspase-9、m TOR和NF-κB m RNA的表達情況。結果:1.隨IP6干預濃度的增加和時間的延長,IP6對HT-29細胞生長的抑制作用逐漸... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第1章 材料與方法
    1.1 細胞及主要試劑
    1.2 主要儀器
    1.3 溶液配制
    1.4 實驗方法
        1.4.1 細胞培養(yǎng)、傳代、凍存和復蘇
        1.4.2 藥物干預
        1.4.3 實驗分組
        1.4.4 MTT實驗
        1.4.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡（AnnexinV-FITC/PI雙染法）
        1.4.6 蛋白樣品制備
        1.4.7 BCA法測蛋白濃度
        1.4.8 western blot
        1.4.9 實時定量PCR（Real-time PCR）方法檢細胞中mRNA的表達
            1.4.9.1 Trizol法RNA提取步驟
            1.4.9.2RNA濃度的測定
            1.4.9.3 引物的設計及合成
            1.4.9.4 反轉錄
            1.4.9.5 PCR擴增
        1.4.10 統(tǒng)計學處理
第2章 結果
    2.1 MTT比色法測定IP_6對HT-29細胞凋亡的誘導作用效果
    2.2 Annexin V-FITC/PI雙標記法檢測細胞凋亡
    2.3 IP_6對PI3K、Akt、pAkt、caspase-9 蛋白表達的影響
    2.4 IP_6抑制HT-29細胞PI3K、Akt、caspase-9 及mTOR mRNA的表達，上調(diào)caspase-9 及NF-κ B mRNA的表達
        2.4.1 IP_6作用后對HT-29結腸癌細胞PI3K、Akt的mRNA表達的影響
        2.4.2 IP_6作用后對HT-29結腸癌細胞caspase-9mRNA表達的影響
        2.4.3 IP_6作用后對HT-29結腸癌細胞mTOR mRNA表達的影響
        2.4.4 IP_6作用后對HT-29結腸癌細胞NF-κ B mRNA表達的影響
第3章 討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
縮略詞表
攻讀學位期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]IP6對人肝癌細胞HepG2細胞周期及相關調(diào)控因子的影響[D]. 李馨.青島大學 2011



本文編號：3574919