研究背景:腎癌是一種常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,其最為主要的病理類型是腎細胞癌（renal cell carcinoma,RCC）,占到腎癌患者總數(shù)的90%以上。RCC可進一步細分,其中透明細胞腎癌（Clear renal cell carcinoma,ccRCC）是RCC的主要病理類型,約占RCC發(fā)病總數(shù)的85%以上。目前,外科手術(shù)切除仍然是單一病灶等原發(fā)性腎癌的首選方案,但對于轉(zhuǎn)移、擴散、復(fù)發(fā)的腎癌,以及身體條件不能耐受外科手術(shù)治療的患者,靶向治療是其主要治療策略。目前,包括索拉非尼（Sorafenib）、舒尼替尼（Sunitinib）等在內(nèi)的分子靶向藥物已在腎癌臨床診療中得到了廣泛應(yīng)用,為患者帶來福音。盡管如此,腎癌分子靶向治療仍存在諸多問題:（1）腎癌分子靶向治療存在不同患者間的個體差異,目前尚無分子靶向藥物治療腎癌患者預(yù)后的明確的指示分子;（2）腎癌分子靶向治療存在有藥物耐受（Drug-resistance）的現(xiàn)象;（3）分子靶向治療費用昂貴。如有可靠方法對患者接受分子靶向治療的效果進行檢測進而對患者加以區(qū)分,有助于緩解患者的經(jīng)濟負擔(dān)。因此,研究和建立相關(guān)研究模型與研究方法,對患者對... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ccRCC組織標本的病理染色（H&E染色）結(jié)果

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖1.2在ccRCC細胞系以及PDCs中進行分子靶向藥物作用靶標（受體酪氨酸蛋白激酶以及MAPK、PI3K/AKT信號通路所屬蛋白激酶）的表達檢測使用定量PCR（qPCR）檢測ccRCC細胞系Caki-1、Caki-2、786-O以及5株ccRCCPDCs中分子靶向藥物作用靶標（RTKs等）的表達水平。依據(jù)其相對表達量（相對于內(nèi)參β-Actin的表達水平）繪制熱圖標尺顯示為表達量的上限與下限Figure1.2DetectionoftheexpressionoftargetsofmoleculartargetingagentsinccRCCcelllines,Caki-1,Caki-2or786-OandfivelinesofccRCCPDCs.QuantitativePCR(qPCR)wasusedtodetecttheexpressionlevelsoftargetsofmoleculartargetingagents(RTKs,etc.)intheccRCCcelllinesCaki-1,Caki-2,786-O,andccRCCPDCs.Heatmapbasedonitsrelativeexpressionlevel(relativetotheexpressionlevelofβ-Actinintheinternalreference/loadingcontrol).3.3對ccRCCPDCs進行長期體外培養(yǎng)其分子靶向藥物作用靶標的表達出現(xiàn)明顯下降現(xiàn)已證實，惡性腫瘤細胞在腫瘤組織內(nèi)部的存活與增殖等生物學(xué)行為，受到了組織微環(huán)境、腫瘤組織間質(zhì)以及機體內(nèi)環(huán)境等的共同作用，其生物行為學(xué)特征等與體外培養(yǎng)（細胞在培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿中進行充分伸展的貼壁生長）環(huán)境與條件截然不同，因此經(jīng)過體外長期培養(yǎng)的腫瘤細胞系，其特性與生物學(xué)行為與腫瘤組織內(nèi)的腫瘤細胞存在很大差異。而ccRCC細胞對分子靶向藥物的敏感性/臨床應(yīng)答的基礎(chǔ)便是ccRCC細胞中這些分子靶向藥物作用靶標的表達量。為此，我們在前述研究基礎(chǔ)上（3.1部分與3.2部分），對不同培養(yǎng)/擴增方法/條件對ccRCCPDCs細胞中分子靶向藥物作用靶標的表達進行了

第一部分：利用透明細胞腎癌患者來源細胞系建立裸鼠腫瘤模型15檢測。結(jié)果如圖3-圖12（VEFR-1[圖1.3]、VEGFR-2[圖1.4]、VEGFR-3[圖1.5]、PDGFR-α[圖1.6]、PDGFR-β[圖1.7]、c-Kit[圖1.8]、AKT[圖1.9]、ERK-1[圖1.10]以及ERK-2[圖1.11]）所示，經(jīng)過長期的體外培養(yǎng)（1周、兩周和3周），ccRCCPDCs中分子靶向藥物的作用靶標逐漸下降。這表明，體外培養(yǎng)ccRCCPDCs能夠改變ccRCCPDCs的特性，經(jīng)過長期體外培養(yǎng)，ccRCCPDCs細胞會逐漸丟失一些分子靶向藥物的作用靶標。3.4ccRCCPDCs的制備及其質(zhì)量控制進一步在前述研究（3.1部分、3.2部分以及3.3部分）基礎(chǔ)上，進一步利用裸鼠成瘤的方法對ccRCCPDCs進行了擴增，結(jié)果如圖1.3-圖1.12（VEFR-1[圖1.3]、VEGFR-2[圖1.4]、VEGFR-3[圖1.5]、PDGFR-α[圖1.6]、PDGFR-β[圖1.7]、c-Kit[圖1.8]、AKT[圖1.9]、ERK-1[圖1.10]以及ERK-2[圖1.11]）所示，通過裸鼠成瘤作用實現(xiàn)ccRCCPDCs的擴增（通過裸鼠成瘤的方法對ccRCCPDCs實現(xiàn)3次擴增），ccRCCPDCs中分子靶向藥物作用靶標的表達能夠保持穩(wěn)定（圖1.3）。這表明，通過裸鼠成瘤作用實現(xiàn)ccRCCPDCs的擴增能夠保持其自身特性的穩(wěn)定，反映出其在患者體內(nèi)的特征。圖1.3通過體外培養(yǎng)或裸鼠成瘤作用實現(xiàn)5株ccRCCPDCs的擴增以及不同擴增方法對ccRCCPDCs中分子靶向藥物作用靶標VEGFR-1表達的影響分別通過體外培養(yǎng)以及裸鼠成瘤的方法實現(xiàn)ccRCCPDCs的擴增，再使用定量PCR檢測ccRCCPDCs中分子靶向藥物作用靶標（VEGFR-1）的表達水平。依據(jù)不同組中目標基因相對表達量（相對于β-Actin的倍數(shù)）繪制折線圖


本文編號：3574277