脂肪酸合成酶（FASN）在生物體內(nèi)起著重要的作用,主要參與惡性腫瘤的數(shù)量調(diào)控。本研究旨在構(gòu)建pET28a-FASN原核表達(dá)載體,并表達(dá)重組His-FASN蛋白,對(duì)該基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)與功能的生物信息學(xué)分析。設(shè)計(jì)FASN基因特異性引物,通過PCR擴(kuò)增獲得的目的基因與原核表達(dá)載體pET28a連接,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)His-FASN蛋白。獲得基因片段大小為1 320 bp,編碼440個(gè)氨基酸;成功構(gòu)建至pET28a原核表達(dá)載體,通過優(yōu)化表達(dá),確定在溫度為35℃、IPTG濃度0.5 mmol/L、誘導(dǎo)時(shí)間為6 h的條件下融合蛋白表達(dá)量較高,獲得蛋白大小約為53 kD;生物信息學(xué)分析結(jié)果表明FASN基因編碼的蛋白是一個(gè)不穩(wěn)定且具有親水性的蛋白,不存在信號(hào)肽及跨膜區(qū),可成為蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)有12個(gè)Ser、5個(gè)Thr、3個(gè)Tyr。此外,從蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中發(fā)現(xiàn),相互作用的蛋白包括主要�；o酶A合成酶長鏈家族成員及乙酰輔酶A羧化酶家族成員,為開發(fā)抑制劑藥物提供了理論依據(jù)。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

FASN基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳

重組質(zhì)粒pET28a-FASN的菌液PCR及雙酶切鑒定

利用ExPASy網(wǎng)站中的ProtParam工具對(duì)人類FASN基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析顯示：FASN所編碼的蛋白質(zhì)由522個(gè)氨基酸組成，其中亮氨酸含量最高達(dá)13.0%，比其它氨基酸的含量大很多。FASN編碼蛋白質(zhì)分子量大小為57.466 13 kD，分子式為C2515H3999N725O773S22，等電點(diǎn)理論值為6.08，原子總數(shù)8 034，不穩(wěn)定系數(shù)為41.70，說明FASN基因編碼的蛋白是一個(gè)不穩(wěn)定蛋白；總平均親水性為-0.216，說明FASN基因編碼的蛋白是一個(gè)親水蛋白。圖4 融合蛋白His-FASN的不同時(shí)間的誘導(dǎo)表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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