目的:肝細(xì)胞肝癌（Hepatocellular Carcinoma）是一種高死亡率的原發(fā)性腫瘤。其惡性程度和致死率居高不下,每年大約有25¹00萬肝癌患者死亡,其預(yù)后不良的主要原因主要是肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。肝癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞是肝癌腫瘤微環(huán)境的重要成分之一,與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此,本研究的目的是探究肝癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞通過哪些調(diào)控機(jī)制來促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移。方法:1、收集肝細(xì)胞肝癌組織樣本和癌旁組織樣本提取成纖維細(xì)胞,分離并鑒定提取的兩種成纖維細(xì)胞。分析CAF和PTF間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA和Vimentin的表達(dá)趨勢,比較CAF和PTF自身的遷移能力和增殖活性。2、采用NOD/SCID鼠建立皮下瘤模型,初步驗(yàn)證CAF和PTF對肝癌細(xì)胞皮下成瘤和肺轉(zhuǎn)移能力的作用,并對預(yù)后進(jìn)行分析。采用Transwell小室遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡實(shí)驗(yàn)從體外比較CAF和PTF對肝癌細(xì)胞遷移和侵襲、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用。3、蛋白芯片檢測CAF和PTF分泌蛋白的差異并用Elisa驗(yàn)證蛋白芯片結(jié)果。對肝癌組織樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)分析蛋白芯片篩出的分泌因子與ACTA2... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

肝癌病人腫瘤組織和癌旁組織HE染色圖1：肝癌病人腫瘤組織和癌旁組織HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，間質(zhì)細(xì)胞在腫瘤組織中

圖 2 肝癌病人腫瘤組織和癌旁組織 α-SMA 免疫組織化學(xué)染色圖 2：α-SMA 蛋白在肝癌病人腫瘤組織的表達(dá)高于癌旁組織。1.2.3 肝癌組織中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和成骨成脂誘導(dǎo)我們收集了 50 例肝癌患者的新鮮腫瘤組織和相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本，IV 型膠原酶消化后無菌培養(yǎng)，分離出 CAF 和 PTF 原代細(xì)胞，傳代培養(yǎng)并觀察。收集的 50例標(biāo)本中有 22 例標(biāo)本分離得到 CAF 和 PTF，其中 6 例 CAF 和 PTF 能夠穩(wěn)定傳代。圖 3 選取的患者為中低分化肝細(xì)胞肝癌，臨床病理分級 3 級，TNM 分期 II期，分離培養(yǎng)的 CAF 和 PTF 排列成放射狀或漩渦狀，呈梭形或紡錘狀生長。我們將分離培養(yǎng)得到的 CAF 和 PTF 用成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)兩周，每隔三天更換新鮮成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基。隨著誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間的延長，CAF 和 PTF 形態(tài)逐漸變?yōu)閳A形，胞漿內(nèi)可見小脂滴形成。兩周后油紅 O 染色，倒置相差顯微鏡明場觀察，誘導(dǎo)后的 CAF 和 PTF 胞漿內(nèi)可見大量紅色脂滴（圖 3）。我們將分離培養(yǎng)得到的CAF 和 PTF 用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)三周，每隔三天更換新鮮成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基。隨著誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間的延長，CAF 和 PTF 增殖能力減弱，細(xì)胞形態(tài)日趨不規(guī)

CAF和PTF正常培養(yǎng)形態(tài)和體外成脂、成骨誘導(dǎo)分化;

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J]. Yu Yan,Li-Feng Wang,Rui-Fen Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(33)



本文編號：3554615