目的:探究酪氨酸蛋白激酶6下游（Downstream Of Tyrosine Kinase 6,DOK6）和基因間長鏈非編碼RNA 324（Long Intergenic Non-Protein Coding RNA 00324,LINC00324）兩者在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中的表達及甲基化水平,并分析兩者的臨床意義及對白血病細胞株的生物學(xué)表型的影響。方法:本研究收集32名正常人、108名初診成人AML患者的骨髓樣本及相應(yīng)臨床數(shù)據(jù)作為研究對象。利用實時定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）技術(shù)檢測正常人和A ML患者骨髓樣本中DOK6和LINC00324的相對表達水平。利用實時定量甲基化特異性P CR（real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP）和非甲基化特異性PCR（u nmethylation-specific PCR,USP）技術(shù)檢測正常人和AML患者骨髓樣本中DOK6和LINC00324的啟動子區(qū)甲基化水平。利用亞硫酸氫鹽... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

lncRNA作用模式圖[51]

急性髓系白血病中DOK6與LINC00324表達及甲基化研究8表達和差異甲基化水平，并可能在白血病細胞株中發(fā)揮抑癌作用[82]。因此，本實驗旨在通過檢測DOK6在AML中的表達水平及啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)來探究其與白血病的臨床特征的相關(guān)性以及其對患者預(yù)后的影響。1.2研究方案設(shè)計1.2.1研究對象選取及標本收集；1.2.2骨髓中的骨髓單個核細胞（bonemarrowmesenchymalcells，BMMNCs）的提�。�1.2.3BMMNCs中細胞總RNA及DNA的提�。�1.2.4總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，亞硫酸氫鹽修飾基因組DNA；1.2.5設(shè)計并合成qPCR及MSP/USP/BSP引物；1.2.6qPCR檢測AML患者及對照組中目標基因及ABL的表達水平；1.2.7RQ-MSP和BSP檢測并驗證目標基因的甲基化水平；1.2.8目標基因與AML患者臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性分析；1.2.9目標基因表達與其啟動子區(qū)甲基化水平相關(guān)性分析；1.2.10白血病細胞株的去甲基化處理；主要技術(shù)路線圖如下（圖2）：圖2主要技術(shù)路線圖。Figure2Maintechnologyroadmap.

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文23Nx=（Ex）△CTx(control-sample)÷（EABL）△CTABL(control-sample)（3.1）注：x表示待檢目的基因；E=10(-1/slope)，△CT指各檢測基因的AML標本或?qū)φ諛吮镜腃T值與相應(yīng)的作為參照的CT值的差值。3.1.2AML患者中DOK6表達的ROC曲線為了觀察DOK6表達鑒別AML患者和正常人的能力，我們繪制了ROC曲線，詳見圖4。其AUC為0.741，95%置信區(qū)間（confidenceinterval，CI）為0.657-0.825，結(jié)果顯示DOK6表達水平能有效鑒別AML和正常人（P<0.001）。3.1.3DOK6表達水平與AML患者臨床參數(shù)相關(guān)性為了進一步分析DOK6表達水平與AML患者各項臨床特征和實驗室參數(shù)之間的關(guān)系。我們根據(jù)ROC曲線確定了cutoff值，并將該cutoff值作為截斷點將總體AML病例分為DOK6低表達組和DOK6高表達組。其中高表達組29例，低表達組46例，統(tǒng)計分析顯示高、低表達組在性別、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）含量、骨髓原始細胞比例、白細胞（whitebloodcells，WBC）、FAB亞型的分布、基因突變和染色體核型等方面均未觀察到統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05，詳見表4）。但是高表達組和低表達組間的年齡、PLT計數(shù)及治療后完全緩解（completeremission，CR）方面存在差異，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，表4）。圖3不同分類和FAB分型的AML患者中DOK6表達與對照組的差異。A：分類差異；B：分型差異。Figure3DifferencesinDOK6expressionbetweenAMLpatientswithdifferentclassificationsandFABtypescomparedwithcontrols.A:Differentclassifications;B:DifferentFABtypes.圖4DOK6表達的受試者工作特征曲線。Figure4ROCcurveanalysisofDOK6expressionfordiscriminatingAMLpatientsfromcontrols.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]急性髓系白血病患者外周血白細胞長鏈基因間非編碼RNA324（LINC00324）與免疫表型的相關(guān)性分析[J]. 劉奕,張洋洋,謝佳瑩,鮑衛(wèi),謝彬彬,周吉成,曾麒燕.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019(09)
[2]DOK2對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響及其與胃癌預(yù)后的關(guān)系[J]. 焦金霞,王永飛,李明,楊洋,張寧,邢象斌,馬三梅.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2015(05)
[3]mRNA expression of DOK1-6 in human breast cancer[J]. Tamara Ghanem,James Bracken,Abdul Kasem,Wen G Jiang,Kefah Mokbel.  World Journal of Clinical Oncology. 2014(02)



本文編號：3550284