研究目的:組蛋白伴侶最初被認(rèn)為是組蛋白的載體,隨著研究的進(jìn)一步深入,現(xiàn)在被認(rèn)為是在組蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的各個(gè)階段起著關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子的作用。特定的組蛋白伴侶可以促進(jìn)特定的組蛋白組裝成核小體,這一過(guò)程是在新合成或者DNA修復(fù)過(guò)程中染色質(zhì)重組的一個(gè)重要步驟,在DNA復(fù)制和修復(fù)過(guò)程中組蛋白伴侶對(duì)于染色質(zhì)組裝的調(diào)節(jié)起著非常重要的作用。H3-H4的組蛋白伴侶anti-silencing function1（ASF1）在染色質(zhì)組裝過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用,雖然有報(bào)道稱組蛋白伴侶ASF1A在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤組織中失調(diào),但是ASF1A的豐度和功能是如何被調(diào)控的,其具體的分子機(jī)制尚不明確。Ubiquitin-specific peptidase 52/poly（A）nuclease 2（USP52/PAN2）是泛素特異性蛋白酶（USP）超家族的一個(gè)成員,它包括一個(gè)WD40重復(fù)結(jié)構(gòu)域,一個(gè)泛素C端水解酶（UCH）結(jié)構(gòu)域和一個(gè)屬于DEDD超家族的C端RNA酶結(jié)構(gòu)域。根據(jù)以前的研究,USP52在PAN2/PAN3脫腺苷化復(fù)合體中被描述為一個(gè)聚腺苷核酸酶,并且最近一篇報(bào)道稱USP52是P-body（processin... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ASF1A相互作用蛋白鑒定(A).親和純化和質(zhì)譜分析ASF1A相互作用蛋白復(fù)合物

27且其洗脫峰大小遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其單體本身的分子量。更重要的是，ASF1A的洗脫峰與USP52重疊的流出峰主要集中在第9到15流出樣品中（圖1.2A）。另外我們對(duì)細(xì)胞組分進(jìn)行分離，將得到的細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核部分分別進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)USP52能夠特異性的與細(xì)胞質(zhì)而非細(xì)胞核內(nèi)的ASF1A進(jìn)行相互作用（圖1.2B），緊接著為了進(jìn)一步明確ASF1A與USP52在細(xì)胞內(nèi)的定位，我們采用免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)二者主要是共同定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)（圖1.2C）。以上這些結(jié)果進(jìn)一步支持了我們的觀點(diǎn)，即ASF1A能夠與USP52在體內(nèi)存在相互作用，并且他們的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。圖 1.2ASF1A 與 USP52 共定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi) （A）從穩(wěn)定表達(dá) FLAG-ASF1A 的 HeLa 細(xì)胞中純化出與 ASF1A 相互作用的蛋白復(fù)合物，利用快速蛋白質(zhì)液相色譜法在 Superose 6 凝膠柱中分離出不同大小的蛋白復(fù)合物。將色譜洗脫液進(jìn)行 IB 檢測(cè)，孵育相應(yīng)抗體。校準(zhǔn)蛋白的洗脫位置的分子量大小如圖所示。（B）利用 MCF-7 的不同細(xì)胞組分進(jìn)行免疫共沉淀分析

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、組蛋白伴侶ASF1A與USP52相互作用用（圖 1.3C），同樣的 USP52/WD40 能夠與全長(zhǎng)的 ASF1A 以及 ASF1A 的前 30個(gè)氨基酸發(fā)生直接相互作用（圖 1.3D）�？偟膩�(lái)說(shuō)，這些結(jié)果證明了 USP52 的WD40 結(jié)構(gòu)域以及 ASF1A 的前 30 個(gè)氨基酸是介導(dǎo)二者直接相互作用的結(jié)構(gòu)域。


本文編號(hào)：3550126