研究目的:組蛋白伴侶最初被認為是組蛋白的載體,隨著研究的進一步深入,現(xiàn)在被認為是在組蛋白轉運的各個階段起著關鍵調節(jié)因子的作用。特定的組蛋白伴侶可以促進特定的組蛋白組裝成核小體,這一過程是在新合成或者DNA修復過程中染色質重組的一個重要步驟,在DNA復制和修復過程中組蛋白伴侶對于染色質組裝的調節(jié)起著非常重要的作用。H3-H4的組蛋白伴侶anti-silencing function1（ASF1）在染色質組裝過程中起著非常關鍵的作用,雖然有報道稱組蛋白伴侶ASF1A在包括乳腺癌在內的多種腫瘤組織中失調,但是ASF1A的豐度和功能是如何被調控的,其具體的分子機制尚不明確。Ubiquitin-specific peptidase 52/poly（A）nuclease 2（USP52/PAN2）是泛素特異性蛋白酶（USP）超家族的一個成員,它包括一個WD40重復結構域,一個泛素C端水解酶（UCH）結構域和一個屬于DEDD超家族的C端RNA酶結構域。根據(jù)以前的研究,USP52在PAN2/PAN3脫腺苷化復合體中被描述為一個聚腺苷核酸酶,并且最近一篇報道稱USP52是P-body（processin... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：165 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ASF1A相互作用蛋白鑒定(A).親和純化和質譜分析ASF1A相互作用蛋白復合物

27且其洗脫峰大小遠遠超過其單體本身的分子量。更重要的是，ASF1A的洗脫峰與USP52重疊的流出峰主要集中在第9到15流出樣品中（圖1.2A）。另外我們對細胞組分進行分離，將得到的細胞質以及細胞核部分分別進行免疫共沉淀實驗，發(fā)現(xiàn)USP52能夠特異性的與細胞質而非細胞核內的ASF1A進行相互作用（圖1.2B），緊接著為了進一步明確ASF1A與USP52在細胞內的定位，我們采用免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)二者主要是共同定位于細胞質內（圖1.2C）。以上這些結果進一步支持了我們的觀點，即ASF1A能夠與USP52在體內存在相互作用，并且他們的相互作用是發(fā)生在細胞質內。圖 1.2ASF1A 與 USP52 共定位于細胞質內 （A）從穩(wěn)定表達 FLAG-ASF1A 的 HeLa 細胞中純化出與 ASF1A 相互作用的蛋白復合物，利用快速蛋白質液相色譜法在 Superose 6 凝膠柱中分離出不同大小的蛋白復合物。將色譜洗脫液進行 IB 檢測，孵育相應抗體。校準蛋白的洗脫位置的分子量大小如圖所示。（B）利用 MCF-7 的不同細胞組分進行免疫共沉淀分析

天津醫(yī)科大學博士學位論文 一、組蛋白伴侶ASF1A與USP52相互作用用（圖 1.3C），同樣的 USP52/WD40 能夠與全長的 ASF1A 以及 ASF1A 的前 30個氨基酸發(fā)生直接相互作用（圖 1.3D）�？偟膩碚f，這些結果證明了 USP52 的WD40 結構域以及 ASF1A 的前 30 個氨基酸是介導二者直接相互作用的結構域。


本文編號：3550126