研究目的:通過多種方法檢測Ⅲ期胃癌患者血清及腹腔沖洗液中CEA及CK19的陽性表達(dá)情況,利用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以尋找能夠提高腹腔脫落癌細(xì)胞陽性檢出率的方法。材料和方法:選擇吉林大學(xué)第一醫(yī)院胃結(jié)直腸外科2015年10月至2016年10月期間經(jīng)術(shù)后病理確診為Ⅲ期的腹腔鏡胃癌根治性手術(shù)患者112例為實(shí)驗(yàn)組,選取胃潰瘍或胃良性腫瘤的患者25例為對照組。收集患者術(shù)前血清CEA、CK19等指標(biāo);收集第1次（對照組及實(shí)驗(yàn)組術(shù)前,如原有腹水則直接吸出）、第2次（實(shí)驗(yàn)組關(guān)腹前）腹腔沖洗液,每次約300-500ml。其中第1次所取腹腔沖洗液約200ml行qRT-PCR檢測CEAmRNA及CK19mRNA表達(dá)情況,剩余采集的腹腔沖洗液用作傳統(tǒng)脫落細(xì)胞學(xué)、腫瘤標(biāo)志物及免疫組化等方法的檢測;第2次所取全部腹腔沖洗液行qRT-PCR方法的檢測。收集患者手術(shù)標(biāo)本病理信息等。結(jié)果:本研究中對照組25例非胃癌患者傳統(tǒng)脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果均為陰性,腹腔沖洗液CEA免疫組化檢查結(jié)果陽性率為12%（3/25）;實(shí)驗(yàn)組112例胃癌患者第1次腹腔沖洗液傳統(tǒng)脫落細(xì)胞學(xué)檢查陽性率為14.29%（16/112）,CEA免疫組化陽性率42.... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RNA電泳-質(zhì)量鑒定

Human CEACAM5-F TTTCTCCCTATGTGGTCGCTCCAGHuman CEACAM5-R AGCAGATTTTTATTGAACTTGTGCHuman KRT19-F GCTGAGCATGAAAGCTGCCTHuman KRT19-R CCTGATTCTGCCGCTCACTA3.4.5.5.2 引物的靈敏性及特異性驗(yàn)證（1）選取 AGS 胃癌細(xì)胞株作為陽性對照，GAPDH 作為內(nèi)參基因，并設(shè)置 NTC（ddH2O為模板）陰性對照。（2）根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的擴(kuò)增曲線、CT 值、熔解曲線分析擴(kuò)增效率，對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化退火溫度和時(shí)間，優(yōu)化變性與預(yù)變性條件，優(yōu)化延伸時(shí)間，確定熒光采集的時(shí)間。（3）擴(kuò)增曲線分析，如擴(kuò)增動(dòng)力曲線呈 S 型，且有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，有平臺(tái)期，表明待檢基因獲得滿意的擴(kuò)增。

圖 3.3 熔解曲線（5）電泳鑒定分析，如溶膠上無雜帶，清晰透亮。則也進(jìn)一步證明產(chǎn)物特異性較好。圖 3.4 PCR 產(chǎn)物電泳鑒定3.4.5.5.3 待測樣本的 qRT-PCR 過程，構(gòu)建 20ul 反應(yīng)體系，將模板、引物等

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]胃癌腹腔脫落細(xì)胞的研究[D]. 王偉.吉林大學(xué) 2016
[2]進(jìn)展期胃癌腹腔鏡根治手術(shù)的臨床資料回顧分析[D]. 李守震.吉林大學(xué) 2014



本文編號：3546580