目的：設(shè)計同時靶向B淋巴細胞表面CD20 和CD19 兩個抗原蛋白的雙特異嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor,CAR）并制備BiCAR-T細胞，檢測其對B淋巴細胞腫瘤細胞的殺傷作用以及對免疫缺陷B-NSG小鼠白血病模型的治療效果。方法：構(gòu)建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的雙靶點CAR分子，將CAR基因裝載于慢病毒載體中，在293T細胞中包裝慢病毒，感染健康人T 細胞制備BiCAR-T 細胞。構(gòu)建表達CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表達Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 細胞作為靶細胞，將BiCAR-T 細胞與靶細胞共同孵育，檢測其對靶細胞殺傷能力及釋放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 細胞構(gòu)建白血病小鼠模型，尾靜脈注射BiCAR-T細胞，通過小動物成像方法觀察BiCAR-T細胞對荷瘤小鼠的治療作用。結(jié)果：健康人來源的BiCAR-T 細胞經(jīng)7 d 培養(yǎng)后擴增良好，擴增倍數(shù)為20～50 倍，陽性率為10%～92%，顯示成功制備BiCAR-T細胞。在效靶比為10∶... 

【文章來源】：中國腫瘤生物治療雜志. 2020,27(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

CD20/CD19 CAR分子設(shè)計示意圖

為了進一步驗證雙靶點BiCAR-T細胞對于CD19和/或CD20陽性腫瘤細胞的殺傷能力，基于CD19和CD20陰性腫瘤細胞K562構(gòu)建了靶細胞K562-CD19-GFP和K562-CD20-GFP。另外還構(gòu)建了同時表達luciferase和GFP的CD19和CD20雙陽性的Nalm6-Luc-GFP細胞。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果（圖3）顯示，3種靶細胞的luciferase表達陽性率分別為99.9%、99.3%和99.9%。通過單克隆篩選，本實驗獲得GFP陽性細胞系。圖3 成功構(gòu)建分別表達CD19、CD20或luciferase及GFP的靶細胞系

成功構(gòu)建分別表達CD19、CD20或luciferase及GFP的靶細胞系


本文編號：3543492