研究背景:癌-睪丸抗原基因（cancer-testis antigen gene）,又名癌-生殖系基因（cancer-germlinegene）,是一類可在多種腫瘤組織中表達(dá),而在睪丸組織和卵巢組織的生殖系細(xì)胞以外的其它正常組織和細(xì)胞中幾乎不表達(dá)的基因。MAEL基因最先是從P轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)產(chǎn)生的雌性不育果蠅突變體Maelstrom中克隆的[1],因而被命名為Maelstrom（簡稱為MAEL）。以往有關(guān)MAEL基因的研究都局限于其在生殖細(xì)胞中的功能分析,本研究室于2010年首次報道MAEL基因是一個癌-睪丸抗原基因。隨后,其他研究者報道了MAEL在肝癌、結(jié)腸癌和膀胱癌中的作用和分子機制。然而,MAEL在乳腺癌和胃癌的作用及其分子機制還不清楚。研究目的:本研究目的是系統(tǒng)探討AEL基因在乳腺癌和胃癌中的作用及其分子機制,為這兩類癌癥的治療、診斷和預(yù)后判斷提供新的理論依據(jù)和潛在的治療靶點。研究方法:采用免疫組織化學(xué)分析、Western blot和Realtime PCR技術(shù)檢測在乳腺癌、胃癌等癌組織和細(xì)胞系中MAEL基因表達(dá)水平。采用生物信息學(xué)軟件分析癌癥數(shù)據(jù)庫中轉(zhuǎn)錄組、基因組和臨床資料數(shù)據(jù),用... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－２免疫組化分析結(jié)果

挑選陽性單克隆從而得到穩(wěn)定過表達(dá)的■說穩(wěn)定細(xì)胞株。ＭＴＴ細(xì)胞增殖實??驗以及克隆形成實驗結(jié)果表明，在正常乳腺細(xì)胞系ＨＢＬ－１００中過表達(dá)側(cè)況基因，??促進細(xì)胞增殖（圖２－３Ａ）和增強細(xì)胞克隆形成能力（圖２－３Ｂ）。??〇：；：?＿?＾纖顯顯??ｍ：；ｊ．ｕ?，－＿Ｌ?參魯＿？??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＭＡＥＬ?Ｉ??圖２－３在正常乳腺細(xì)胞株ＨＢＬ－１００中過表達(dá)ＭＡＥＬ基因促進細(xì)胞增殖和克隆形成??（Ａ）過表達(dá)ＭＡＥＬ對細(xì)胞增殖能力的影響；（Ｂ）過表達(dá)ＭＡＥＬ對細(xì)胞克隆形成能力的影??響；Ｃｏｎｔｒｏｌ：對照病毒，ＭＡＥＬ：ＭＡＥＬ過表達(dá)病毒。??２．?３．?３似沒基因敲入小鼠模型的構(gòu)建??２．?３．?３．?１?Ｒｏｓａ２６位點Ｌｏｘｐ－你￡＾？基因ｋｎｏｃｋ－ｉｎ小鼠打革巴載體構(gòu)建??從質(zhì)粒中獲得Ｍｙｃ－趟況基因片段，將Ｍｙｃ－淑況ｃＤＮＡ經(jīng)Ｎｏｔｌｌ?＆?Ｓａｉｌ酶切??克隆至Ｇａｔｅ?（ｎｅｏ）質(zhì)粒的Ｎｏｔｌｌ?＆?Ｓａｉｌ位點，獲得Ｇａｔｅ－ｙＭ￡Ｚ質(zhì)粒，質(zhì)粒經(jīng)??測序驗證后，用該質(zhì)粒和Ｒｏｓａ－ＤＥＳＴ，通過ＬＲ重組方式，獲得打靶載體??Ｒｏｓａ－Ｍｙｃ－ＭＡＥＬ質(zhì)粒（圖２－４Ａ），載體序列位置（表２－１）．用Ｘｈｏ?Ｉ線性化后用于??ＥＳ細(xì)胞打靶（圖２－４Ｂ），打靶策略（圖２－５）。??＿?２０??

?ＰＧＫ－ｎｅｏ－ｐｏｌｙＡ?ＤＴＡ??圖２－５?Ｍｙｃ－ＭＥＬ基因ｋｎｏｃｋｉｎ的打靶策略，重組同源臂長度分別是１０８７ｂｐ和４２５９ｂｐ??表２－１?Ｍｙｃ－Ｍａｅｌ基因的打祀載體序列位置??Ｒｏｓａ２６－Ｍｙｃ－Ｍａｅｌ?（１４５７２ｂｐ）??ｓｔａｒｔ?ｅｎｄ?ｎａｍｅ／ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??３?１０８９?５，ａｒｍ?（１０８７）??１２７２?３９７１?Ｌｏ


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