目的本研究旨在探討ASK1(Apoptosis signal-regulating kinase 1)在肺癌細(xì)胞增殖和遷移信號傳導(dǎo)中的作用,并揭示其調(diào)控機制,為開拓新的肺癌分子靶點奠定理論基礎(chǔ),為肺癌的臨床診斷和治療提供新思路。方法1、采用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)在肺癌A549和H1975細(xì)胞株中穩(wěn)定過表達(dá)ASK1野生型(ASK1-WT)和激酶失活突變體(ASK1-KD),并用免疫印跡檢測過表達(dá)效果;通過細(xì)胞計數(shù)實驗來檢測過表達(dá)ASK1后,對肺癌細(xì)胞增殖能力的影響。2、通過Transwell實驗和劃痕實驗檢測過表達(dá)ASK1后對肺癌細(xì)胞遷移的影響。3、利用p38抑制劑SB203380處理A549細(xì)胞,通過細(xì)胞計數(shù)、Transwell實驗和劃痕實驗,評估p38信號通路在ASK1介導(dǎo)的肺癌細(xì)胞增殖和遷移中的作用。4、通過GST pull-down方法檢測ASK1是否與YAP和TAZ相互作用。5、采用血清處理肺癌A549和H1975細(xì)胞,通過實時熒光定量PCR和免疫印跡法檢測ASK1對YAP/TAZ靶基因CYR61和CTGF的影響;通過免疫熒光檢測ASK1對YAP和TAZ核定位的影響。6、采用慢病毒表達(dá)...

【文章來源】： 江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【文章目錄】：
摘要
abstract
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第一章 緒論
    1.1 肺癌
    1.2 ASK1
        1.2.1 ASK1概述
        1.2.2 ASK1在疾病和腫瘤中的作用
    1.3 YAP/TAZ
        1.3.1 YAP/TAZ概述
        1.3.2 YAP/TAZ與腫瘤
    1.4 研究意義
第二章 ASK1在肺癌細(xì)胞增殖和遷移中的作用
    2.1 實驗儀器和實驗試劑
        2.1.1 實驗細(xì)胞
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗耗材
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 質(zhì)粒的擴增與提取
        2.2.3 構(gòu)建和篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
        2.2.4 Western blotting檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞中ASK1表達(dá)
        2.2.5 細(xì)胞增殖實驗
        2.2.6 細(xì)胞遷移實驗
    2.3 統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 過表達(dá)ASK1抑制肺癌細(xì)胞增殖
        2.4.2 過表達(dá)ASK1抑制肺癌細(xì)胞遷移
        2.4.3 ASK1抑制肺癌細(xì)胞增殖和遷移不依賴于p38信號通路
    2.5 討論
第三章 ASK1抑制TAZ活性
    3.1 實驗儀器和實驗試劑
        3.1.1 實驗細(xì)胞
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗耗材
        3.1.4 實驗儀器
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 GST pull-down
        3.2.3 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)
        3.2.4 Western blotting
        3.2.5 免疫熒光
    3.3 統(tǒng)計分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 ASK1與YAP和TAZ的WW結(jié)構(gòu)域相互作用
        3.4.2 ASK1抑制YAP/TAZ靶基因的轉(zhuǎn)錄
        3.4.3 ASK1特異抑制TAZ活性
    3.5 討論
第四章 TAZ在肺癌細(xì)胞增殖和遷移中的作用
    4.1 實驗儀器和實驗試劑
        4.1.1 實驗細(xì)胞
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗耗材
        4.1.4 實驗儀器
        4.1.5 試劑配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 TAZ shRNA干擾載體構(gòu)建
        4.2.2 質(zhì)粒的擴增和提取
        4.2.3 構(gòu)建和篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
        4.2.4 Western blotting檢測TAZ敲低效果
        4.2.5 細(xì)胞增殖和遷移實驗
    4.3 統(tǒng)計分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 敲低TAZ對細(xì)胞增殖和遷移產(chǎn)生的抑制作用與ASK1相似
    4.5 討論
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
    發(fā)表論文



本文編號：3536966