第一部分 肺癌中E3泛素連接酶TRIM7促進(jìn)p65蛋白降解的功能研究trim 7（tripartite motif-containing 7）基因編碼了 GNIP1,GNIP2,GNIP3 和TRIM7等至少4個亞型的蛋白質(zhì)。其中,氨基酸序列最長的亞型GNIP1已經(jīng)被報(bào)道在肺癌中發(fā)揮著原癌基因的作用。TRIM7是現(xiàn)在已知四個亞型中氨基酸序列最短的蛋白,其在羧基端（C末端）有15個堿基與GNIP1不同。然而有趣的是,我們的研究顯示TRIM7在肺癌中的功能與GNIP1截然相反。與癌旁組織相比,TRIM7在肺癌組織中是低表達(dá)的,且與肺癌的臨床分級負(fù)相關(guān)。此外,腫瘤異種移植實(shí)驗(yàn)也證實(shí)TRIM7能夠抑制小鼠皮下腫瘤的生長。在細(xì)胞中,TRIM7能夠顯著地抑制肺癌細(xì)胞系的增殖和遷移,同時促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),TRIM7能與NF-κB信號通路中的p65蛋白相互作用并泛素化修飾p65蛋白,通過TRIM7羧基末端的15個氨基酸與p65蛋白相互結(jié)合并添加泛素分子,導(dǎo)致p65蛋白經(jīng)泛素化依賴性的26S蛋白酶體降解,最終抑制NF-κB信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些研究結(jié)果揭示了一個新的由TRIM7參與的NF-... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２．?１?ＴＲＩＭ７在部分非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中低表達(dá)??Ａ、圖示描述人類ＧＮＩＰ１和ＴＲＩＭ７蛋白的結(jié)構(gòu)

?第一部分第２章ＴＲ１Ｍ７在肺癌中呈現(xiàn)低表達(dá)???胞肺癌中ＴＲＩＭ７蛋白的表達(dá)情況，我們使用非小細(xì)胞肺癌組織芯片，通過免疫??組化的方法檢測了?８２例非小細(xì)胞肺癌病人癌組織及癌旁組織中ＴＲＩＭ７蛋白的表??達(dá)。通過統(tǒng)計(jì)分析，我們發(fā)現(xiàn)ＴＲＩＭ７表達(dá)水平有隨著非小細(xì)胞肺癌臨床分期等??級提高而降低的趨勢（圖２．２ＢＯ，同時有６２對組織的癌組織中ＴＲＩＭ７表達(dá)水??平低于癌旁組織（圖２．２Ｄ）。這說明ＴＲＪＭ７蛋白水平在非小細(xì)胞肺癌中是低表??達(dá)的。??Ａ?１＃?２＃?３＃?４＃??八?，?、?，￣、?，￣、?Ｚ＾、??、Ｔ?Ｎ?Ｔ?Ｎ?ＪＴ＾?Ｎ?Ｔ??ＴＫＩＭ７＾｜＾?ｐ＊?＂７＊?ｆ：＇：：?Ｓｉ?１１??Ｐ？八ｃ“ｎ?＊?１１１１１１?ｍｍｍｍ?ｗ?ｒｎｍｍｍ?ｍｍｍｍ?ｍｍｍ??Ｐ－Ａｃｔｉｎ?＾一?：：一＾丨丨一??ＮＴ?ＮＴ?ＮＴ?ＮＴ??＾＾＾＾??５＃?６＃?７＃?８＃??Ｂ?Ｓｔａｇｅ?Ｉ?Ｓｔａｇｅ?ＩＩ?Ｓｔａｇｅ?１１１??Ｔｕｍｏｒ?ｔｉｓｓｕｅ??；＂?�。椋�?＇＿Ｌ?．?＿?．?＊?．??＊?？？？?－?八．《?．?■?．??■ｗ?丨＇??Ａｄｊａｃｅｎｔ?？?（ｉ?．?．?．?＇?＼：－?，??ｎｏｒｍａｌ?ｔｉｓｓｕｅ?：?，?；．?Ｉ?＇?■?＾?＇?？??．－ｖ．：：．．人??Ｃ?…?Ｄ??ｌ?２００］?＾?＇?￣Ｔ＂?■?Ｓｔａｇｅ?Ｉ?〇?｜１５??Ｉ?１叫?ｆ?．?ｉｉｆ］?Ｓｉｌａｇｌｌｌｌ?１｜｜?丨｜｜｜??ｉｊｌｉｏ（１１１?ＰＦｉｌｌｉ

第一部分第３章影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、凋亡、周期以及遷移等表型??解細(xì)胞提�。遥危练崔D(zhuǎn)錄生成ｃＤＮＡ，用于實(shí)時定量ＰＣＲ檢測ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１??和ＸＩＡＰ等凋亡和周期相關(guān)基因的表達(dá)。Ｄ、ＮＱ－Ｈ１２９９細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染ｐＣＭＶ６空載質(zhì)粒、??ｔＧＦＰ－ＴＲＩＭ７質(zhì)粒。４８小時后，裂解細(xì)胞提取總蛋白通過蛋白免疫印跡檢測凋亡（左圖）和??周期（右圖）相關(guān)蛋白的表達(dá)。??３．?４．?３過表達(dá)ＴＲＩＭ７影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞遷移??我們將１０ｃｍ培養(yǎng)皿中的ＮＣＩ－Ｈ１２９９細(xì)胞接種至６孔板，使貼壁后細(xì)胞密度??至７０％－８０％。然后用ＰＣＭＶ６４ＧＦＰ－ＴＲＪＭ７質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，２４小時細(xì)胞密度達(dá)??到９０％－１００％后進(jìn)行劃痕。之后分別在０、１２、２４小時對同一位置用顯微鏡拍照。??我們發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，過表達(dá)ＴＲＩＭ７后細(xì)胞“傷痕”的愈合速度明顯變慢（圖??３．３Ａ）。結(jié)果統(tǒng)計(jì)如圖３．３Ｂ所示。這表明過表達(dá)ＴＲＩＭ７顯著地抑制了?ＮＣＩ－Ｈ１２９９??細(xì)胞的遷移能力。??Ａ?Ｏｈ?１２?ｈ?２４?ｈ??Ｖｅｃｔｏｒ??ＴＲＩＭ７??Ｂ??ＣＤ?１００ｌ?ｗ?．??ｃ?■?Ｖｅｃｔｏｒ??ｉ?８０－?■?ＴＲＩＭ７??０）??Ｘ：??＂Ｄ?６０￣??爹?Ａ??ｓ?２〇－?■?＿??１２ｈ?２４ｈ??圖３．?３過表達(dá)ＴＲＩＭ７影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞遷移??Ａ、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)。ＮＣＩ－Ｈ１２９９細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染ｐＣＭＶ６空載質(zhì)粒、ｔＧＦＰ－ＴＲＩＭ７質(zhì)粒。２４－４８??小時，待細(xì)胞密度達(dá)到９０％－１００％進(jìn)廳劃痕操作。ＰＢＳ洗去懸浮細(xì)胞后加入含１％ＦＢＳ的培??２４??


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