目的:人類乳頭瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV）與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們前期研究表明,HPV16 E6和E7能夠上調(diào)肺癌細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1（GLUT1）的表達(dá)水平。然而,E6和E7是否能夠促進(jìn)GLUT1葡萄糖攝取能力及其調(diào)控機制目前尚不清楚。已有研究表明,硫氧還蛋白互作蛋白（TXNIP）能夠調(diào)控GLUT1的表達(dá)及其葡萄糖攝取能力。但尚無研究報道HPV16與TXNIP之間是否存在聯(lián)系。在本篇研究中,我們的目的是探索HPV16對肺癌細(xì)胞中TXNIP和GLUT1的調(diào)控作用及其潛在作用機制。研究方法:1.本研究分別應(yīng)用轉(zhuǎn)染和干擾技術(shù)雙向調(diào)控肺癌細(xì)胞H1299和A549細(xì)胞中E6和E7蛋白,通過Western blotting和qRT-PCR方法分別檢測下游基因PTEN磷酸化水平、TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表達(dá)變化。2.應(yīng)用干擾技術(shù)分別敲除PTEN和TXNIP的表達(dá),檢測下游基因TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表達(dá)變化。3.應(yīng)用核漿分離技術(shù)檢測敲除TXNIP后在細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞漿內(nèi)的HIF-1α蛋白表達(dá)變化。4.... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1在H1299細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染E6質(zhì)粒

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10結(jié)果顯示，過表達(dá)E7后，PTEN磷酸化水平明顯降低，TXNIP蛋白和mRNA表達(dá)水平也明顯降低。與此同時，我們發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)E7后，GLUT1蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯增高，HIF-1α蛋白表達(dá)水平也明顯增高，但是并未影響HIF-1α的mRNA表達(dá)水平(圖3.1.2)。圖3.1.2在H1299細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-E7質(zhì)粒至H1299細(xì)胞系，E7空載體和Mock轉(zhuǎn)染作為對照。以Westernblot檢測E7,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表達(dá)水平，以qRT-PCR檢測E7,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表達(dá)水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2敲除E6和E7，PTEN磷酸化水平和TXNIP表達(dá)水平明顯增高，HIF-1α及GLUT1表達(dá)水平明顯降低.3.2.1在A549細(xì)胞中敲除E6后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表達(dá)水平明顯增高，HIF-1α及GLUT1表達(dá)水平明顯降低為了進(jìn)一步研究E6與PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之間的相互作用。我們將E6特異性siRNA轉(zhuǎn)染至低表達(dá)E6的A549細(xì)胞系中，以E6非特異性siRNA和Mock特異性siRNA作為對照。結(jié)果顯示，敲除E6后，PTEN磷酸化水平明顯增高，TXNIP蛋白和mRNA表達(dá)水平也明顯增高。與此同時，敲除E6后，GLUT1蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯降低，HIF-1α蛋白表達(dá)水平也明顯降低，但是并未影響HIF-1α的mRNA表達(dá)水平(圖3.2.1)。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖3.2.1在A549細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siE6干擾體轉(zhuǎn)染E6特異性的siRNA至A549細(xì)胞。E6非特異性siRNA和Mock特異性siRNA作為對照。以Westernblot檢測E6,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表達(dá)水平，以qRT-PCR檢測E6,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表達(dá)水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2.2在A549細(xì)胞中敲除E7后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表達(dá)水平明顯增高，HIF-1α及GLUT1表達(dá)水平明顯降低為了進(jìn)一步研究E7與PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之間的相互作用，我們將E7特異性siRNA轉(zhuǎn)染至低表達(dá)E7的A549細(xì)胞系中，以E7非特異性siRNA和Mock特異性siRNA作為對照。結(jié)果顯示，敲除E7后，PTEN磷酸化水平明顯增高，TXNIP蛋白和mRNA表達(dá)水平也明顯增高，GLUT1蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平明顯降低。敲除E7后，HIF-1α蛋白表達(dá)水平明顯降低,但是并未影響HIF-1α的mRNA表達(dá)水平。(圖3.2.2)。圖3.2.2在A549細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siE7干擾體轉(zhuǎn)染E7特異性siRNA至A549細(xì)胞中。E7非特異性siRNA和Mock特異性siRNA作為對照。以

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3507576