[目的]研究shRNA抑制eEF1A1表達(dá)對(duì)肝癌Hca-P細(xì)胞凋亡、增殖、遷移的影響,并通過(guò)分別下調(diào)eEF1A1和ANXA7的表達(dá),探討肝癌Hca-P細(xì)胞中eEF1A1、eEF1A2與ANXA7表達(dá)的相關(guān)性及潛在的相互作用。[方法]構(gòu)建靶向eEF1A1基因的shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至小鼠肝癌Hca-P細(xì)胞中,設(shè)無(wú)處理組（CON）、eEF1A1-shRNA組（eEF1A1-shRNA）、轉(zhuǎn)染pGPU/GFP/Neo-NC的陰性對(duì)照組（NC）三組細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)檢測(cè)eEF1A1的抑制效果,并分別檢測(cè)各組eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。CCK-8法、流式細(xì)胞儀、Transwell小室分別檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移的影響。此外,復(fù)蘇已穩(wěn)定低表達(dá)ANXA7的Hca-P細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)檢測(cè)無(wú)處理組（CON）、ANXA7-shRNA轉(zhuǎn)染組（ANXA7-shRNA）、陰性對(duì)照組（NC）三組Hca-P細(xì)胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。[結(jié)果]eEF1A1靶向shR... 

【文章來(lái)源】：腫瘤學(xué)雜志. 2018,24(08)

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 一般材料
    1.2 方法
        1.2.1 sh RNA合成
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)m RNA表達(dá)
        1.2.4 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
        1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        1.2.6 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        1.2.7 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 轉(zhuǎn)染p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA和p G-PU/GFP/Neo-NC的效率鑒定
    2.2 e EF1A1-sh RNA對(duì)肝癌Hca-P細(xì)胞e EF1A1表達(dá)的影響
    2.3 下調(diào)肝癌Hca-P細(xì)胞e EF1A1的表達(dá)對(duì)e EF1A2與ANXA7表達(dá)的影響
    2.4 下調(diào)肝癌Hca-P細(xì)胞ANXA7的表達(dá)對(duì)e EF1A1、e EF1A2表達(dá)的影響
    2.5 下調(diào)e EF1A1的表達(dá)誘導(dǎo)肝癌Hca-P細(xì)胞凋亡
    2.6 下調(diào)e EF1A1的表達(dá)抑制肝癌Hca-P細(xì)胞增殖
    2.7 下調(diào)e EF1A1的表達(dá)抑制肝癌Hca-P細(xì)胞遷移
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]siRNA抑制真核翻譯延長(zhǎng)因子1A1表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和藥物敏感性的影響[J]. 蘇啟表,韋桂寧,劉洪俊,李辰生,廖麗貞,趙杰,李國(guó)標(biāo),李衛(wèi)東.  中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2015(17)
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本文編號(hào)：3504703