[目的]研究shRNA抑制eEF1A1表達對肝癌Hca-P細胞凋亡、增殖、遷移的影響,并通過分別下調(diào)eEF1A1和ANXA7的表達,探討肝癌Hca-P細胞中eEF1A1、eEF1A2與ANXA7表達的相關(guān)性及潛在的相互作用。[方法]構(gòu)建靶向eEF1A1基因的shRNA質(zhì)粒表達載體,瞬時轉(zhuǎn)染至小鼠肝癌Hca-P細胞中,設(shè)無處理組（CON）、eEF1A1-shRNA組（eEF1A1-shRNA）、轉(zhuǎn)染pGPU/GFP/Neo-NC的陰性對照組（NC）三組細胞進行實驗。采用實時熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)檢測eEF1A1的抑制效果,并分別檢測各組eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表達。CCK-8法、流式細胞儀、Transwell小室分別檢測對細胞增殖、凋亡、遷移的影響。此外,復(fù)蘇已穩(wěn)定低表達ANXA7的Hca-P細胞,通過實時熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)檢測無處理組（CON）、ANXA7-shRNA轉(zhuǎn)染組（ANXA7-shRNA）、陰性對照組（NC）三組Hca-P細胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表達。[結(jié)果]eEF1A1靶向shR... 

【文章來源】：腫瘤學(xué)雜志. 2018,24(08)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 一般材料
    1.2 方法
        1.2.1 sh RNA合成
        1.2.2 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實時熒光定量PCR檢測m RNA表達
        1.2.4 Western Blot檢測蛋白表達
        1.2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        1.2.6 CCK8法檢測細胞增殖
        1.2.7 Transwell小室檢測細胞遷移能力
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 轉(zhuǎn)染p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA和p G-PU/GFP/Neo-NC的效率鑒定
    2.2 e EF1A1-sh RNA對肝癌Hca-P細胞e EF1A1表達的影響
    2.3 下調(diào)肝癌Hca-P細胞e EF1A1的表達對e EF1A2與ANXA7表達的影響
    2.4 下調(diào)肝癌Hca-P細胞ANXA7的表達對e EF1A1、e EF1A2表達的影響
    2.5 下調(diào)e EF1A1的表達誘導(dǎo)肝癌Hca-P細胞凋亡
    2.6 下調(diào)e EF1A1的表達抑制肝癌Hca-P細胞增殖
    2.7 下調(diào)e EF1A1的表達抑制肝癌Hca-P細胞遷移
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]siRNA抑制真核翻譯延長因子1A1表達對結(jié)腸癌細胞凋亡和藥物敏感性的影響[J]. 蘇啟表,韋桂寧,劉洪俊,李辰生,廖麗貞,趙杰,李國標,李衛(wèi)東.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2015(17)
[3]膜聯(lián)蛋白A7表達抑制對HepG-2細胞中g(shù)alectin-3及PKC表達的影響[J]. 田煥娜,王小杰,梁秀軍,陳龍,劉蘭芳,李欣.  中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志. 2015(02)
[4]RNA干擾真核翻譯延長因子1A1抑制肝癌Hep3B細胞的增殖[J]. 晏琛,劉秀霞,戈進,溫崇煜,余新,邵江華.  腫瘤. 2014(11)
[5]膜聯(lián)蛋白A7低表達對人肝癌HepG2細胞增殖的影響[J]. 王小杰,李欣.  解剖學(xué)報. 2013 (05)
[6]eEF1A1回復(fù)表達對敲除eEF1A1基因的Jurkat細胞增殖、凋亡的影響及機制研究[J]. 黃毅,胡建達,伍嚴安,鄭靜,齊元麟,陳英玉,黃肖利.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2013(02)
[7]采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選小鼠肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白[J]. 孫成榮,唐建武,孫明忠,劉淑清,張宏穎,王波,宋波,張亞楠,張竹清,趙志英.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2007(08)



本文編號：3504703