MicroRNA（MiRNA）在許多生物學(xué)過程中都發(fā)揮著重要的作用,被認(rèn)為是一種有前景的癌癥標(biāo)記物。MiRNA在植物和動(dòng)物的真核細(xì)胞中存在的一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA。MiRNA參與了人體60%以上的蛋白編碼基因的調(diào)控,在許多生理過程中起著關(guān)鍵的作用。越來越多的證據(jù)表明,miRNA已成為臨床早期診斷的一種重要的生物標(biāo)志物,患者組織和血液中的異常miRNA的表達(dá)水平與多種人類疾病如癌癥和心血管疾病都密切相關(guān)。隨著對miRNA這些小分子作用機(jī)制的深入研究,將有助于我們更好的理解和克服人類疾病。本論文主要分為以下幾部分:1.在指數(shù)等溫?cái)U(kuò)增的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了一種基于發(fā)夾探針快速、靈敏檢測miRNA的方法。靶miRNA結(jié)合單鏈DNA模板引發(fā)指數(shù)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)并產(chǎn)生大量和發(fā)卡探針1的3?突出末端互補(bǔ)配對的引物。這些引物的功能是不僅能通過催化發(fā)夾自組裝展開發(fā)夾探針產(chǎn)生不同的熒光信號,而且還可以作為引物引發(fā)下一個(gè)指數(shù)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)。通過對擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光檢測,miRNA的檢測限可以低至0.1 zmol。本實(shí)驗(yàn)以miR-21作為引物,并根據(jù)miR-21設(shè)計(jì)兩種不同的用熒光染料標(biāo)記的探針,這種基于發(fā)夾探針的循環(huán)指... 

【文章來源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MiRNA的作用機(jī)理[12]

基于發(fā)卡核酸檢測 microRNA 的熒光分析法及其在癌癥預(yù)警中的應(yīng)用1977年由斯坦福大學(xué)的JamesAlwine, David Kemp和GeorNorthern-blotting 法的基本原理是在與硝酸纖維素膜結(jié)合酸探針之間進(jìn)行互補(bǔ)雜交，經(jīng)洗膜顯影后對條帶進(jìn)行分lotting 法簡單易行、可以測量 RNA 的質(zhì)量和數(shù)量、印跡點(diǎn)也不可忽視，實(shí)驗(yàn)耗時(shí)耗量、需要標(biāo)記、靈敏度較低微的序列差異。更重要的是，Northern-blotting 法的問題化學(xué)藥品如甲醛、放射性物質(zhì)、溴化乙錠和紫外線的使題以及環(huán)境的安全問題[20]。

EXPAR法檢測microRNA[29]


本文編號：3495592