TMEM16A（又稱ANO1）是一種鈣激活氯離子通道,屬于TMEM16膜蛋白家族,具有10個跨膜結(jié)構(gòu)域。TMEM16A在多種上皮細胞、平滑肌細胞、心肌細胞、神經(jīng)元等中廣泛表達,具有多種重要的功能,如調(diào)節(jié)分泌上皮細胞分泌液體,平滑肌收縮,神經(jīng)和心肌的興奮等。其功能障礙與癌癥、胃腸道疾病、高血壓以及囊性纖維化等許多疾病相關(guān)。近年來,研究發(fā)現(xiàn)在多種癌癥中,如乳腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、前列腺癌等,TMEM16A表達上調(diào),參與調(diào)控癌細胞的增殖和遷移。結(jié)直腸癌為惡性腫瘤,嚴重危害人類健康。研究發(fā)現(xiàn)TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中有表達,其表達可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生與進展相關(guān),因此TMEM16A可以作為研究結(jié)直腸癌進展的靶點。在本研究中,利用qPCR、Western blot和免疫細胞化學(xué)的方法,檢測了人正常腸上皮細胞NCM460、人結(jié)直腸腺癌細胞SW480、SW620中TMEM16A的表達。使用TMEM16A抑制劑T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01、木犀草素（Luteolin）和TMEM16A激活劑劑Eact、離子霉素（Ionomycin）藥,利用CCK-8法檢測細胞的增殖,流式細胞術(shù)檢... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 鈣激活氯離子通道
    1.2 TMEM16A的發(fā)現(xiàn)
    1.3 TMEM16A的生理功能
        1.3.1 上皮細胞液體轉(zhuǎn)運
        1.3.2 平滑肌收縮
        1.3.3 神經(jīng)興奮與疼痛感受
    1.4 TMEM16A與癌癥
        1.4.1 TMEM16A在癌癥中的表達
        1.4.2 TMEM16A與癌細胞的增殖、凋亡
        1.4.3 TMEM16A與癌細胞的遷移、侵襲
        1.4.4 TMEM16A與蛋白質(zhì)的相互作用
    1.5 TMEM16A與結(jié)直腸癌
        1.5.1 結(jié)直腸癌
        1.5.2 誘發(fā)結(jié)直腸癌的主要因素
        1.5.3 TMEM16A在結(jié)直腸癌中的表達
        1.5.4 TMEM16A對結(jié)直腸癌的影響
    1.6 TMEM16A與信號通路
        1.6.1 MAPK信號通路
        1.6.2 PI3K/AKT/m TOR信號通路
        1.6.3 NF-κB信號通路
    1.7 TMEM16A通道活性對腫瘤細胞的影響
    1.8 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實驗細胞
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 實時定量熒光PCR實驗
        2.2.3 免疫蛋白印跡實驗
        2.2.4 細胞活力實驗
        2.2.5 細胞增殖實驗
        2.2.6 免疫細胞化學(xué)
        2.2.7 細胞劃痕實驗
        2.2.8 細胞遷移實驗
        2.2.9 細胞周期實驗
        2.2.10 細胞凋亡實驗
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中表達上調(diào)
        3.1.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中的m RNA表達分析
        3.1.2 TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中的蛋白表達分析
        3.1.3 免疫細胞化學(xué)法檢測TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中的表達
    3.2 TMEM16A鈣激活氯離子通道對結(jié)直腸癌細胞增殖的影響
        3.2.1 CCK-8法測定結(jié)直腸癌細胞的增殖
        3.2.2 TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞活力的影響
        3.2.3 抑制TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞增殖的影響
        3.2.4 激活TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞增殖的影響
    3.3 TMEM16A鈣激活氯離子通道對結(jié)直腸癌細胞有絲分裂的影響
        3.3.1 抑制TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞周期的影響
        3.3.2 激活TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞周期的影響
    3.4 Hoechst33258 熒光染色法觀察結(jié)直腸癌細胞核固縮和染色質(zhì)片斷化
    3.5 TMEM16A鈣激活氯離子通道對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響
        3.5.1 抑制TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響
        3.5.2 激活TMEM16A通道活性對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響
        3.5.3 Transwell細胞遷移分析結(jié)果
        3.5.4 結(jié)直腸癌細胞中波形蛋白表達上調(diào)
4 討論
    4.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細胞中表達上調(diào)
    4.2 TMEM16A通道活性與結(jié)直腸癌細胞的增殖
    4.3 TMEM16A通道活性與結(jié)直腸癌細胞的遷移
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人大腸癌細胞株SW620/SW480轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白及機制研究[J]. 蔡未央,張燕捷.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2019(15)
[2]組織蛋白酶D、Tmem 16a和乳腺腫瘤激酶在結(jié)腸癌中的表達及意義[J]. 陳曦,孫海斌.  中國老年學(xué)雜志. 2014(07)
[3]鞣酸通過下調(diào)TMEM16A的表達抑制人結(jié)腸癌細胞SW620細胞的增殖[J]. 李尚坤,傅仲學(xué),文坤明,吳星燁.  重慶醫(yī)學(xué). 2014(01)
[4]TMEM16A在結(jié)腸癌組織中的表達及其意義[J]. 楊軍,劉妮,康安靜,趙世平,黃曉鐘,蘇寶山,陳曉黎,李宗芳.  世界華人消化雜志. 2012(35)

博士論文
[1]TNFα介導(dǎo)鈣離子內(nèi)流促進肝癌細胞凋亡的作用及機制研究[D]. 朱劍軍.中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué) 2018



本文編號：3462235