目的:探討ER-α36不同表達水平對三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞株miRNAs表達譜的影響以及阿霉素耐藥的三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞株miRNAs表達譜的變化。通過篩選出差異表達的miRNAs并分析其調(diào)控的靶基因與信號通路,為進一步揭示乳腺癌細胞ER-α36表達對三陰性乳腺癌生物學(xué)行為影響可能的分子調(diào)控機制及阿霉素耐藥機制提供更多的實驗依據(jù),同時也為高表達ER-α36乳腺癌患者的分子診斷、臨床分型、預(yù)后判斷、耐藥監(jiān)測等提供新的候選檢測指標(biāo)和臨床檢測新途徑。方法:1.采用慢病毒轉(zhuǎn)染法將負載ER-α36特異性短發(fā)夾RNA的重組慢病毒轉(zhuǎn)染至三陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-231,通過嘌呤霉素篩選,以構(gòu)建ER-α36基因沉默的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,并采用該細胞株建立裸鼠移植瘤模型。同時采用阿霉素耐藥的三陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-231/ADR建立相應(yīng)裸鼠移植瘤模型。2.分別采用qRT-PCR法和Western blot法檢測ER-α36沉默后及阿霉素耐藥的MDA-MB-231細胞株和移植瘤的ER-α36 m RNA及ER-α36蛋白的表達變化。3.分別設(shè)置慢病毒感染ER-α36... 

【文章來源】：成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌細胞中的相對表達量注：A.qRT-PCR檢測ER-α36mRNA表達；B.Westernblot檢測ER-α36蛋白表達

27MCF-10A和MCF-7細胞中ER-α36表達水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.05），見圖1A和圖1B。AB圖1ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌細胞中的相對表達量注：A.qRT-PCR檢測ER-α36mRNA表達；B.Westernblot檢測ER-α36蛋白表達。*表示P0.05，**表示P<0.0013.2熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率通過熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染72h時熒光表達豐度較高，轉(zhuǎn)染效率超過90%，且MDA-MB-231細胞形態(tài)正常生長良好，見圖2�？瞻讓φ战M陰性對照組沉默實驗組圖2感染72h時，熒光顯微鏡下觀察細胞（200×）3.3轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞ER-α36mRNA和蛋白表達根據(jù)2-ΔΔCt值作圖，ER-α36mRNA表達結(jié)果見圖3A。與空白對照組相比，

28陰性對照組ER-α36mRNA的表達變化不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；沉默實驗1、2、3組ER-α36mRNA表達均被明顯抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.001），其中沉默實驗1組的干擾效果最佳，選用該組shRNA-V1序列進行后續(xù)實驗。根據(jù)WB條帶圖及灰度值計算，ER-α36蛋白表達結(jié)果見圖3B。與空白對照組相比，陰性對照組ER-α36蛋白表達幾乎無變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；沉默實驗1、2、3組ER-α36蛋白表達均受到不同程度的抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P0.05），與qRT-PCR結(jié)果一致。AB圖3轉(zhuǎn)染后細胞ER-α36mRNA和蛋白相對表達量注：A.qRT-PCR檢測ER-α36mRNA表達；B.Westernblot檢測ER-α36蛋白表達。control為空白對照組，shRNA-NC為陰性對照組，shRNA-V1、V2、V3分別為沉默實驗1、2、3組。*表示P0.05，**表示P<0.0013.4轉(zhuǎn)染后裸鼠移植瘤體積變化各組裸鼠均出現(xiàn)移植瘤，腫瘤體積變化見圖4。與空白對照組相比，陰性對照組腫瘤體積變化趨勢一致，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；沉默實驗組腫瘤體積較小且增長速度減慢，腫瘤生長被抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3377207