目的:探討ER-α36不同表達(dá)水平對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株miRNAs表達(dá)譜的影響以及阿霉素耐藥的三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株miRNAs表達(dá)譜的變化。通過篩選出差異表達(dá)的miRNAs并分析其調(diào)控的靶基因與信號(hào)通路,為進(jìn)一步揭示乳腺癌細(xì)胞ER-α36表達(dá)對(duì)三陰性乳腺癌生物學(xué)行為影響可能的分子調(diào)控機(jī)制及阿霉素耐藥機(jī)制提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù),同時(shí)也為高表達(dá)ER-α36乳腺癌患者的分子診斷、臨床分型、預(yù)后判斷、耐藥監(jiān)測(cè)等提供新的候選檢測(cè)指標(biāo)和臨床檢測(cè)新途徑。方法:1.采用慢病毒轉(zhuǎn)染法將負(fù)載ER-α36特異性短發(fā)夾RNA的重組慢病毒轉(zhuǎn)染至三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231,通過嘌呤霉素篩選,以構(gòu)建ER-α36基因沉默的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,并采用該細(xì)胞株建立裸鼠移植瘤模型。同時(shí)采用阿霉素耐藥的三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231/ADR建立相應(yīng)裸鼠移植瘤模型。2.分別采用qRT-PCR法和Western blot法檢測(cè)ER-α36沉默后及阿霉素耐藥的MDA-MB-231細(xì)胞株和移植瘤的ER-α36 m RNA及ER-α36蛋白的表達(dá)變化。3.分別設(shè)置慢病毒感染ER-α36... 

【文章來源】：成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量注：A.qRT-PCR檢測(cè)ER-α36mRNA表達(dá)；B.Westernblot檢測(cè)ER-α36蛋白表達(dá)

27MCF-10A和MCF-7細(xì)胞中ER-α36表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P0.05），見圖1A和圖1B。AB圖1ER-α36在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量注：A.qRT-PCR檢測(cè)ER-α36mRNA表達(dá)；B.Westernblot檢測(cè)ER-α36蛋白表達(dá)。*表示P0.05，**表示P<0.0013.2熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率通過熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染72h時(shí)熒光表達(dá)豐度較高，轉(zhuǎn)染效率超過90%，且MDA-MB-231細(xì)胞形態(tài)正常生長(zhǎng)良好，見圖2�？瞻讓�(duì)照組陰性對(duì)照組沉默實(shí)驗(yàn)組圖2感染72h時(shí)，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞（200×）3.3轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細(xì)胞ER-α36mRNA和蛋白表達(dá)根據(jù)2-ΔΔCt值作圖，ER-α36mRNA表達(dá)結(jié)果見圖3A。與空白對(duì)照組相比，

28陰性對(duì)照組ER-α36mRNA的表達(dá)變化不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；沉默實(shí)驗(yàn)1、2、3組ER-α36mRNA表達(dá)均被明顯抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P0.001），其中沉默實(shí)驗(yàn)1組的干擾效果最佳，選用該組shRNA-V1序列進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)WB條帶圖及灰度值計(jì)算，ER-α36蛋白表達(dá)結(jié)果見圖3B。與空白對(duì)照組相比，陰性對(duì)照組ER-α36蛋白表達(dá)幾乎無變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；沉默實(shí)驗(yàn)1、2、3組ER-α36蛋白表達(dá)均受到不同程度的抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P0.05），與qRT-PCR結(jié)果一致。AB圖3轉(zhuǎn)染后細(xì)胞ER-α36mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量注：A.qRT-PCR檢測(cè)ER-α36mRNA表達(dá)；B.Westernblot檢測(cè)ER-α36蛋白表達(dá)。control為空白對(duì)照組，shRNA-NC為陰性對(duì)照組，shRNA-V1、V2、V3分別為沉默實(shí)驗(yàn)1、2、3組。*表示P0.05，**表示P<0.0013.4轉(zhuǎn)染后裸鼠移植瘤體積變化各組裸鼠均出現(xiàn)移植瘤，腫瘤體積變化見圖4。與空白對(duì)照組相比，陰性對(duì)照組腫瘤體積變化趨勢(shì)一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；沉默實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積較小且增長(zhǎng)速度減慢，腫瘤生長(zhǎng)被抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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