研究背景:卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在我國位居第三位僅次于宮頸癌和宮體癌,嚴(yán)重影響人類健康。近年來,ADP核糖聚合酶（Poly ADP-ribose Polymerase,PARP）抑制劑在卵巢癌的治療中取得顯著成效,開啟了小分子抑制劑靶向治療卵巢癌的大門。目前,PARP抑制劑主要被批準(zhǔn)用于BRCA（Breast cancer）突變的卵巢癌患者。然而,隨著臨床試驗數(shù)據(jù)的累積,研究者發(fā)現(xiàn)不論患者是否存在BRCA突變,使用PARP抑制劑Niraparib Rucaparib治療的卵巢癌患者均能獲益,顯著改善了患者的無疾病生存期。因此,如何從PARP1（Poly ADP-ribose Polymerase 1）的生物學(xué)功能出發(fā)理解臨床上這一現(xiàn)象成為該領(lǐng)域的研究熱點。隨著PARP1研究的深入關(guān)于它的其他生物學(xué)功能也開始受到關(guān)注。近年來的研究發(fā)現(xiàn)PARP1可以通過激活轉(zhuǎn)錄因子、抑制轉(zhuǎn)錄因子活性的方式或直接作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因表達,從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的多種生物學(xué)功能。本研究通過分析TCGA數(shù)據(jù)庫（The cancer genome atlas）發(fā)現(xiàn)PARP1 m RNA高度表達... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
緒論
1 第一部分PARP1 抑制MT1M轉(zhuǎn)錄促進卵巢癌轉(zhuǎn)移的作用研究
    1.1 引言
    1.2 實驗材料與儀器
        1.2.1 細(xì)胞株
        1.2.2 感受態(tài)細(xì)菌
        1.2.3 質(zhì)粒
        1.2.4 藥物與主要試劑
        1.2.5 實驗儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.3.3 質(zhì)粒擴增
        1.3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.3.5 Western blotting法檢測蛋白含量
        1.3.6 蛋白質(zhì)免疫印跡實驗(Western blotting)
        1.3.7 q RT-PCR檢測目的基因m RNA水平
        1.3.8 Elisa檢測
        1.3.9 SRB實驗檢測細(xì)胞增殖
        1.3.10 劃痕愈合實驗
        1.3.11 Transwell小室遷移實驗
        1.3.12 條件培養(yǎng)基制備
        1.3.13 數(shù)據(jù)分析
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 PARP1 調(diào)控的潛在靶基因MT1M
        1.4.2 卵巢癌基因芯片數(shù)據(jù)
        1.4.3 PARP1 負(fù)性調(diào)控MT1M的表達
            1.4.3.1 敲除PARP1對MT1M轉(zhuǎn)錄表達與蛋白表達的影響
            1.4.3.2 過表達PARP1對MT1M轉(zhuǎn)錄表達與蛋白表達的影響
        1.4.4 敲除PARP1對MT1M分泌的影響
        1.4.5 PARP2和PARP3對MT1M表達的影響
        1.4.6 MT1M表達對卵巢細(xì)胞增殖的影響
        1.4.7 MT1M的表達對卵巢細(xì)胞遷移影響
            1.4.7.1 MT1M高度表達抑制卵巢細(xì)胞遷移
            1.4.7.2 MT1M的低表達促進卵巢細(xì)胞遷移
        1.4.8 分泌的MT1M抑制卵巢細(xì)胞遷移
        1.4.9 PARP1的表達對卵巢細(xì)胞遷移的影響
            1.4.9.1 高度表達PARP1促進卵巢細(xì)胞遷移
            1.4.9.2 敲除PARP1抑制卵巢細(xì)胞遷移
    1.5 討論
2 第二部分PARP1 抑制卵巢癌MT1M轉(zhuǎn)錄的分子機制研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與儀器
        2.2.1 細(xì)胞株
        2.2.2 藥物與主要試劑
        2.2.3 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 siRNA轉(zhuǎn)染
        2.3.3 質(zhì)粒擴增
        2.3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.3.5 Western blotting法檢測蛋白含量以Western blotting方法
        2.3.6 q RT-PCR檢測目的基因m RNA水平
        2.3.7 免疫共沉淀實驗
        2.3.8 PAR修飾實驗
        2.3.9 熒光素酶報告基因法(Dual-Luciferase reporter assay)
        2.3.10 熒光素酶報告基因信號測定
        2.3.11 數(shù)據(jù)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 PARP1 通過FOXP3 調(diào)控MT1M的轉(zhuǎn)錄表達
        2.4.2 FOXP3 調(diào)控MT1M的轉(zhuǎn)錄表達
        2.4.3 PARP1與FOXP3 相互結(jié)合
        2.4.4 FOXP3發(fā)生核糖基化修飾
        2.4.5 PARP1 抑制由FOXP3 介導(dǎo)的MT1M的轉(zhuǎn)錄表達
        2.4.6 敲除PARP1 增強卵巢癌細(xì)胞FOXP3 的表達
        2.4.7 PARP抑制劑增強卵巢癌細(xì)胞FOXP3 的表達
    2.5 討論
3 第三部分PARP抑制劑促進MT1M表達抗卵巢癌轉(zhuǎn)移的作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與儀器
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 實驗動物
        3.2.3 藥物與主要試劑
        3.2.4 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 Western blotting法檢測蛋白含量以Western blotting方法
        3.3.3 q RT-PCR檢測目的基因m RNA水平
        3.3.4 SRB實驗檢測細(xì)胞增殖
        3.3.5 Elisa實驗法
        3.3.6 劃痕愈合實驗
        3.3.7 Transwell小室實驗
        3.3.8 蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)染色:H&E染色
        3.3.9 免疫組化染色:
        3.3.10 包裝慢病毒與感染慢病毒
        3.3.11 動物實驗
        3.3.12 數(shù)據(jù)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 PARP抑制劑促進MT1M的轉(zhuǎn)錄表達與分泌
        3.4.2 PARP抑制劑抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移
        3.4.3 MT1M在 PARP抑制劑抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移中的作用
        3.4.4 Olaparib抑制尾靜脈接種卵巢癌細(xì)胞CaOV3 的肺轉(zhuǎn)移
        3.4.5 Olaparib抑制原代卵巢癌HO-8910PM PDX的動物模型的肺轉(zhuǎn)移
    3.5 討論
總結(jié)與展望
參考文獻
附表
綜述 PARP1的其他生物學(xué)功能:DNA修復(fù)之外
    參考文獻
作者簡歷在學(xué)期間所取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]高轉(zhuǎn)移人卵巢癌細(xì)胞系HO-8910PM的建立及其生物學(xué)特性[J]. 許沈華,錢麗娟,牟瀚舟,倪型灝,朱赤紅,張谷,戴惠芳,高永良.  中華病理學(xué)雜志. 1998(06)
[2]高轉(zhuǎn)移人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物學(xué)特性[J]. 許沈華,牟瀚舟,錢麗娟,孫永正,朱赤紅,黃曉曙,高永良,戴珊星.  中華病理學(xué)雜志. 1996(01)



本文編號：3372973