研究背景和目的:從全球范圍看,相對于全身其他部位的惡性腫瘤來說,頭頸部鱗癌惡性腫瘤的發(fā)生率較高,位列第6,每年有大約50萬的新發(fā)病例,并且造成20萬人的死亡。據(jù)統(tǒng)計(jì),頭頸部惡性腫瘤的發(fā)病率為20.6/10萬[1],其中以口腔癌發(fā)病率最高,最常見病理類型為鱗狀細(xì)胞癌,占比約90%[15]。micro RNAs（mi RNAs）是19-23個(gè)堿基大小的RNA序列,廣泛存在于動(dòng)植物、甚至細(xì)菌中,雖然不編碼蛋白質(zhì),卻能對細(xì)胞的生理及病理過程能起到重要的作用。腫瘤的發(fā)生是基因突變的結(jié)果,其的形成及發(fā)展過程中伴隨著多種mi RNAs的異常表達(dá),這種異常表達(dá)隨著腫瘤部位及組織及病理特征的不同而變化。為了更深入的認(rèn)識mi RNAs在口腔鱗狀細(xì)胞癌中所發(fā)揮的作用,本研究對影響調(diào)控口腔鱗癌細(xì)胞增殖及凋亡的mi RNAs進(jìn)行了篩選、鑒定并進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其具體作用機(jī)制。方法:我們對選取的8對口腔鱗癌及其癌旁正常組織進(jìn)行mi RNA芯片分析篩選口腔鱗癌組織中差異化表達(dá)的mi RNAs;在臨床樣本及口腔鱗癌細(xì)胞系中利用real-time PCR的方法進(jìn)行差異性驗(yàn)證,通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的方法對篩選出的差異化mi RN... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA芯片數(shù)據(jù)

生物信息學(xué)的方法進(jìn)行 microRNA 的靶基因預(yù)測icroRNA 靶基因預(yù)測網(wǎng)站：Targetscan(http://www.targetscan.org/)miRBase(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)PicTar(http://pictar.bio.nyn.edu/)MicroCosmTargets(http://www.ebi.ac.uk/)miR-330-3p 靶基因預(yù)測研究通過 microRNA 芯片篩選出在口腔鱗癌中高表達(dá)的 miR-33鱗癌大樣本以及細(xì)胞系中得到驗(yàn)證，進(jìn)一步利用生物信息學(xué)網(wǎng)站靶基因，并與芯片數(shù)據(jù)口腔鱗癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)的基因進(jìn)行去交分別是 CNTFR. PDCD4. YOD1. RECK. GALNT12. BTG2. C7。

材料和方法1.8 PDCD4 3’UTR 雙熒光素酶表達(dá)載體的構(gòu)建以及擴(kuò)增將 PDCD4 的 3’UTR 中可能含有 miR-330-3p 結(jié)合位點(diǎn)的片段克隆、擴(kuò)增，并插入到 pGL3 質(zhì)粒載體的相應(yīng)位點(diǎn)構(gòu)建質(zhì)粒 pGL3-miR-330-3p-PDCD4（拓然生物，上海），之后轉(zhuǎn)染報(bào)告基因載體及模擬物至 293T 細(xì)胞，同時(shí)以 pRL-TK 載體作內(nèi)參，空白 pGL3 作為對照測定相對熒光素酶活性。如圖 1.1，SV40 為啟動(dòng)子，酶切位點(diǎn)為 Xbal。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3273085