本文關(guān)鍵詞：骨肉瘤中缺氧誘導(dǎo)HIF-1α調(diào)控乳酸脫氫酶-A的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:明確骨肉瘤細(xì)胞缺氧條件下HIF-1α調(diào)控乳酸脫氫酶-A的分子機(jī)制及乳酸脫氫酶-A對骨肉瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。方法:1.免疫組化分析18例臨床標(biāo)本,確認(rèn)乳酸脫氫酶-A在骨肉瘤患者中的表達(dá)情況;2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測分析骨肉瘤細(xì)胞系MG63細(xì)胞在常氧條與缺氧條件下乳酸脫氫酶-A的表達(dá)情況。蛋白印記法檢測骨肉瘤細(xì)胞系MG3細(xì)胞在常氧條與缺氧條件下乳酸脫氫酶-A及HIF-1蛋白水平的表達(dá)情況。3.構(gòu)建含有乳酸脫氫酶-A啟動子區(qū)的螢光素酶報(bào)告載體,通過免疫熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)檢測MC63細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)表達(dá)的內(nèi)源性HIF-1是否對乳酸脫氫酶-A具有調(diào)控作用,并進(jìn)一步明確HIF-1對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控位點(diǎn);常氧下轉(zhuǎn)染HIF-1過表達(dá)質(zhì)粒,觀察外源性HIF-1的表達(dá)對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控作用及位點(diǎn)。4.構(gòu)建HIF-1敲除質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞,對比常氧條件與缺氧條件下,敲除HIF-1后是否能有效抑制乳酸脫氫酶-A的表達(dá),從而進(jìn)一步反正HIF-1對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控。5.構(gòu)建乳酸脫氫酶-A敲除質(zhì)粒,缺氧條件下培養(yǎng)MG63細(xì)胞,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),觀察敲除乳酸脫氫酶-A對MG63細(xì)胞的遷移能力的影響。6.通過細(xì)胞活性檢測實(shí)驗(yàn),檢測缺氧條件下敲除乳酸脫氫酶-A后,MG63細(xì)胞的細(xì)胞活力及增殖情況。結(jié)果:1.乳酸脫氫酶-A在大多數(shù)骨肉臨床樣本中高表達(dá),在檢測的18例臨床樣本中,4例弱陽性、8呈陽性、6例呈強(qiáng)陽性,陽性率達(dá)80%;2.缺氧條件下,RT-PCR檢測MG63細(xì)胞中乳酸脫氫酶-A表達(dá)明顯上調(diào),與常氧條件相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);3.通過熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下HIF-1可誘導(dǎo)乳酸脫氫酶-A的表達(dá),其調(diào)控關(guān)系主要通過結(jié)合乳酸脫氫酶-A啟動子區(qū)的缺氧誘導(dǎo)元件-D介導(dǎo)。4.通過RNA干擾技術(shù),缺氧條件下敲除HIF-1α后,明顯的抑制了缺氧對乳酸脫氫酶-A表達(dá)的誘導(dǎo);5.通過劃痕實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下MG63細(xì)胞敲除乳酸脫氫酶-A后,能明顯抑制其遷移能力;6.通過細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)檢測,缺氧條件下MG63細(xì)胞敲除乳酸脫氫酶-A后,其增殖能力受到一定程度的抑制,與未敲除組比較不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤組織中,腫瘤內(nèi)部常處于缺氧狀態(tài),缺氧的微環(huán)境下HIF-1表達(dá)上調(diào),并通過與乳酸脫氫酶A啟動子區(qū)的缺氧誘導(dǎo)原件-D結(jié)合激活其表達(dá)。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)乳酸脫氫酶A可以促進(jìn)骨肉細(xì)胞的遷移,但對肉瘤細(xì)胞的增殖活性未見明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：缺氧 HIF-1 乳酸脫氫酶-A 骨肉瘤
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 材料與方法11-32
• 1.1 主要儀器與器材11-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本14-15
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法15-29
• 1.4.1 實(shí)驗(yàn)一15
• 1.4.2 實(shí)驗(yàn)二15-17
• 1.4.3 實(shí)驗(yàn)三17-19
• 1.4.4 實(shí)驗(yàn)四19-23
• 1.4.5 實(shí)驗(yàn)五23-26
• 1.4.6 實(shí)驗(yàn)六26-28
• 1.4.7 實(shí)驗(yàn)七28-29
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29-32
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-45
• 2.1 乳酸脫氫酶-A在骨肉臨床樣本中高表達(dá)32-35
• 2.2 缺氧可誘導(dǎo)MG63細(xì)胞高表達(dá)乳酸脫氫酶-A35-37
• 2.3 HIF-1 通過綁定HER-D調(diào)控缺氧誘導(dǎo)乳酸脫氫酶-A的表達(dá)37-39
• 2.4 敲除HIF-1Α可消除缺氧對乳酸脫氫酶-A表達(dá)的誘導(dǎo)39-41
• 2.5 缺氧條件下，MG63細(xì)胞敲除乳酸脫氫酶-A后，，能明顯抑制其遷移能力41-42
• 2.6 缺氧條件下，MG63細(xì)胞敲除乳酸脫氫酶-A后，其增殖能力受到一定程度的抑制42-45
• 3 討論45-59
• 3.1 骨肉瘤的流行病學(xué)及治療情況45-47
• 3.2 缺氧對骨肉細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為的影響47-49
• 3.3 HIF-1 與缺氧的關(guān)系49-50
• 3.4 HIF與惡性腫瘤的關(guān)系50-53
• 3.5 HIF-1 與腫瘤的治療53-54
• 3.6 乳酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)作用54-56
• 3.7 HIF-1 與乳酸脫氫酶的關(guān)系56-57
• 3.8 乳酸脫氫酶A對骨肉瘤惡性生物學(xué)行為的影響57-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 綜述 骨肉瘤治療研究進(jìn)展66-71
• 參考文獻(xiàn)70-71
• 致謝71-74
• 個(gè)人簡歷及攻讀學(xué)位期間獲得的科研成果74-75

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊燕,張抗;乳酸脫氫酶速率測定法的探討[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1988年03期

2 劉玉,秦世貞,李文斌;急性低壓缺氧對飛行人員血漿乳酸及乳酸脫氫酶含量的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2000年06期

3 李振榮,張捷,王天成,李國權(quán);對乳酸脫氫酶同工酶譜的異常區(qū)帶和增高的乳酸脫氫酶1組織來源的分析[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年05期

4 陳振勝,金宏偉,黃回濱,陳美s

本文編號：327214