本文關鍵詞：骨肉瘤中缺氧誘導HIF-1α調(diào)控乳酸脫氫酶-A的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:明確骨肉瘤細胞缺氧條件下HIF-1α調(diào)控乳酸脫氫酶-A的分子機制及乳酸脫氫酶-A對骨肉瘤細胞惡性生物學行為的影響。方法:1.免疫組化分析18例臨床標本,確認乳酸脫氫酶-A在骨肉瘤患者中的表達情況;2.實時熒光定量PCR檢測分析骨肉瘤細胞系MG63細胞在常氧條與缺氧條件下乳酸脫氫酶-A的表達情況。蛋白印記法檢測骨肉瘤細胞系MG3細胞在常氧條與缺氧條件下乳酸脫氫酶-A及HIF-1蛋白水平的表達情況。3.構建含有乳酸脫氫酶-A啟動子區(qū)的螢光素酶報告載體,通過免疫熒光素酶活性實驗檢測MC63細胞缺氧誘導表達的內(nèi)源性HIF-1是否對乳酸脫氫酶-A具有調(diào)控作用,并進一步明確HIF-1對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控位點;常氧下轉(zhuǎn)染HIF-1過表達質(zhì)粒,觀察外源性HIF-1的表達對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控作用及位點。4.構建HIF-1敲除質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染MG63細胞,對比常氧條件與缺氧條件下,敲除HIF-1后是否能有效抑制乳酸脫氫酶-A的表達,從而進一步反正HIF-1對乳酸脫氫酶-A的調(diào)控。5.構建乳酸脫氫酶-A敲除質(zhì)粒,缺氧條件下培養(yǎng)MG63細胞,通過細胞劃痕實驗,觀察敲除乳酸脫氫酶-A對MG63細胞的遷移能力的影響。6.通過細胞活性檢測實驗,檢測缺氧條件下敲除乳酸脫氫酶-A后,MG63細胞的細胞活力及增殖情況。結果:1.乳酸脫氫酶-A在大多數(shù)骨肉臨床樣本中高表達,在檢測的18例臨床樣本中,4例弱陽性、8呈陽性、6例呈強陽性,陽性率達80%;2.缺氧條件下,RT-PCR檢測MG63細胞中乳酸脫氫酶-A表達明顯上調(diào),與常氧條件相比較差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05);3.通過熒光素酶報告實驗,我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下HIF-1可誘導乳酸脫氫酶-A的表達,其調(diào)控關系主要通過結合乳酸脫氫酶-A啟動子區(qū)的缺氧誘導元件-D介導。4.通過RNA干擾技術,缺氧條件下敲除HIF-1α后,明顯的抑制了缺氧對乳酸脫氫酶-A表達的誘導;5.通過劃痕實驗,我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下MG63細胞敲除乳酸脫氫酶-A后,能明顯抑制其遷移能力;6.通過細胞活性實驗檢測,缺氧條件下MG63細胞敲除乳酸脫氫酶-A后,其增殖能力受到一定程度的抑制,與未敲除組比較不具統(tǒng)計學意義。結論:本研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤組織中,腫瘤內(nèi)部常處于缺氧狀態(tài),缺氧的微環(huán)境下HIF-1表達上調(diào),并通過與乳酸脫氫酶A啟動子區(qū)的缺氧誘導原件-D結合激活其表達。同時,我們還發(fā)現(xiàn)乳酸脫氫酶A可以促進骨肉細胞的遷移,但對肉瘤細胞的增殖活性未見明顯影響。
【關鍵詞】：缺氧 HIF-1 乳酸脫氫酶-A 骨肉瘤
【學位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 材料與方法11-32
• 1.1 主要儀器與器材11-14
• 1.2 實驗細胞14
• 1.3 實驗標本14-15
• 1.4 實驗方法15-29
• 1.4.1 實驗一15
• 1.4.2 實驗二15-17
• 1.4.3 實驗三17-19
• 1.4.4 實驗四19-23
• 1.4.5 實驗五23-26
• 1.4.6 實驗六26-28
• 1.4.7 實驗七28-29
• 統(tǒng)計學方法29-32
• 2 實驗結果32-45
• 2.1 乳酸脫氫酶-A在骨肉臨床樣本中高表達32-35
• 2.2 缺氧可誘導MG63細胞高表達乳酸脫氫酶-A35-37
• 2.3 HIF-1 通過綁定HER-D調(diào)控缺氧誘導乳酸脫氫酶-A的表達37-39
• 2.4 敲除HIF-1Α可消除缺氧對乳酸脫氫酶-A表達的誘導39-41
• 2.5 缺氧條件下，MG63細胞敲除乳酸脫氫酶-A后，，能明顯抑制其遷移能力41-42
• 2.6 缺氧條件下，MG63細胞敲除乳酸脫氫酶-A后，其增殖能力受到一定程度的抑制42-45
• 3 討論45-59
• 3.1 骨肉瘤的流行病學及治療情況45-47
• 3.2 缺氧對骨肉細胞的惡性生物學行為的影響47-49
• 3.3 HIF-1 與缺氧的關系49-50
• 3.4 HIF與惡性腫瘤的關系50-53
• 3.5 HIF-1 與腫瘤的治療53-54
• 3.6 乳酸脫氫酶的結構及生物學作用54-56
• 3.7 HIF-1 與乳酸脫氫酶的關系56-57
• 3.8 乳酸脫氫酶A對骨肉瘤惡性生物學行為的影響57-59
• 結論59-60
• 參考文獻60-66
• 綜述 骨肉瘤治療研究進展66-71
• 參考文獻70-71
• 致謝71-74
• 個人簡歷及攻讀學位期間獲得的科研成果74-75

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊燕,張抗;乳酸脫氫酶速率測定法的探討[J];臨床檢驗雜志;1988年03期

2 劉玉,秦世貞,李文斌;急性低壓缺氧對飛行人員血漿乳酸及乳酸脫氫酶含量的影響[J];航天醫(yī)學與醫(yī)學工程;2000年06期

3 李振榮,張捷,王天成,李國權;對乳酸脫氫酶同工酶譜的異常區(qū)帶和增高的乳酸脫氫酶1組織來源的分析[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2004年05期

4 陳振勝,金宏偉,黃回濱,陳美s

本文編號：327214