研究背景原發(fā)性肝癌是全球腫瘤相關(guān)致死率位居第二的惡性腫瘤,每年超過一半的新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在中國。肝癌起病隱匿,進(jìn)展迅速,預(yù)后極差;多數(shù)患者即使接受根治性肝癌切除,術(shù)后仍會(huì)出現(xiàn)肝內(nèi)或肝外轉(zhuǎn)移,其中術(shù)后（1年內(nèi)）早期復(fù)發(fā)是影響肝癌患者長(zhǎng)期生存的主要因素。MCM6基因在多種腫瘤中發(fā)揮促癌作用,但在肝癌領(lǐng)域內(nèi)的研究相對(duì)局限,尤其關(guān)于肝癌侵襲轉(zhuǎn)移及早期復(fù)發(fā)中的功能及其機(jī)制的研究,尚未見報(bào)道。目的和意義1.明確MCM6在人肝癌細(xì)胞系、肝癌組織及其匹配癌旁無瘤肝組織中的表達(dá)水平,及其在肝癌患者預(yù)后評(píng)估的價(jià)值;2.探討肝癌發(fā)生發(fā)展過程中MCM6的功能及調(diào)控機(jī)制,以尋求肝癌侵襲轉(zhuǎn)移新的理論依據(jù);3.評(píng)價(jià)血清MCM6表達(dá)水平在肝癌根治切除術(shù)后早期復(fù)發(fā)中的預(yù)測(cè)價(jià)值。研究?jī)?nèi)容與方法1.MCM6在肝癌組織中的表達(dá)及其與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系（1）免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)70例肝癌組織及其匹配癌旁肝組織和30例正常肝組織中MCM6的表達(dá)情況;（2）通過Kaplan-Meier生存分析、log-rank檢驗(yàn)及單因素、多因素COX回歸模型,分析MCM6表達(dá)與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系;通過χ2檢驗(yàn)或Fisher概率法分析... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ＭＣＭ６在各肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況（Ａ）熒光定量ＰＣＲ檢測(cè)在侵襲性不同的肝癌??細(xì)胞系中ＭＣＭ６的表達(dá)情況；（Ｂ）?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ顯示在侵襲性不同的肝癌細(xì)胞系中ＭＣＭ６??的表達(dá)情況??

擴(kuò)增曲線得到各樣品ＭＣＭ６和ＧＡＰＤＨ的ＣＴ值，計(jì)算ＡＣｔ值，以Ｓｃｒａｍｂｌｅ為??對(duì)照，運(yùn)用２＿ＡＡＱ法計(jì)算ｓｈＲＮＡ病毒相對(duì)陰性對(duì)照的ＭＣＭ６的表達(dá)倍數(shù)和千擾??效率（圖２－３Ａ）。結(jié)果顯示，ＨＣＣ－ＬＭ３和Ｓ－ＭＭＣ７７２１細(xì)胞中ＭＣＭ６干擾效??果均具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（戶＜?０．０５）。通過分別檢測(cè)干擾組與陰性對(duì)照組細(xì)??胞中ＭＣＭ６的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示干擾組細(xì)胞中的ＭＣＭ６?ｍＲＮＡ水平較??Ｓｃｒａｍｂｌｅ組明顯降低，在ＨＣＣ－ＬＭ３細(xì)胞中，三種ｓｈＲＮＡ敲低效率分別達(dá)到??６９．３％、７３．０％、８６．０％?（Ｐ＜?０．０５）；在?ＳＭＭＣ７７２１?細(xì)胞中，三種?ｓｈＲＮＡ?敲低效??率分別達(dá)到?７７．２％、６７．８％、８２，８％?（圖?２－３Ａ）。??進(jìn)一步三種ｓｈＲＮＡ的干擾效果通過蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證（詳見圖??２－３Ｂ），實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ＨＣＣ－ＬＭ３和ＳＭＭＣ７７２１中ＭＣＭ６蛋白水平的表達(dá)量明??４３??

免疫熒光結(jié)果顯示：肝癌細(xì)胞中，ＭＣＭ６蛋白主要定位于細(xì)胞核中；??ＨＣＣ－ＬＭ３及ＳＭＭＣ７７２１細(xì)胞感染ｓｈＲＮＡ３－ＭＣＭ６慢病毒后ＭＣＭ６在細(xì)胞核中??的表達(dá)下降（詳見圖２－３Ｃ）。??Ｊ＼?＼?ｎ?Ｏｊ??八?ＨＣＣ－ＬＭ３?ＳＭＭＣ７７２１?＾?＃?＃??１?＜／?／?／?／??卜＿????１?０．８?－?■?■?ＭＣＭ６?鱗???Ｉ??■?■?■?￣Ｔ?ｇ??■。４?■?■?＊?＊?■?＊?＊?ＧＡＰ〇Ｈ?｜＿＿＿叫＂??ｒ?［＂?Ｐｆｉｒｌｎ?，，廠?－６?卜?￣ｊ?謹(jǐn)??屬夕＇祕(mì)，－１－—，丨１??４４??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3265092