發(fā)布時間：2021-06-28 18:42

　　目的通過建立肺癌Lewis細胞（Lewis Lung Cancer,LLC）與骨髓間充質(zhì)干細胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）共培養(yǎng)體系,研究腫瘤微環(huán)境下BMSCs的形態(tài)、增殖、周期及腫瘤相關(guān)成纖維細胞（Tumor-associated Fibroblasts,TAFs）蛋白表達的變化;分析并探討黃芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）對肺癌微環(huán)境中BMSCs增殖規(guī)律的影響及保護作用。方法:1.采用CCK-8法于12⁹6 h分別檢測0²00μg/m L APS對BMSCs、LLC細胞體外增殖的影響,篩選APS最佳有效濃度;利用苯酚-硫酸法檢測6⁷2 h內(nèi)BMSCs、LLC細胞對最佳濃度APS體外代謝的影響,篩選APS最佳藥效時間;2.建立LLC細胞和BMSCs的共培養(yǎng)體系,實驗分4組:正常BMSCs組、肺癌LLC組、共培養(yǎng)模型組及APS最佳藥物濃度干預(yù)組,同時分別設(shè)立48 h換液、72 h換液及不換液3種不同處理方式;3.通過CCK-8法、流式細胞術(shù)分... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

腫瘤微環(huán)境組成

圖 2. 技術(shù)路線圖Figure 2. Technique route2.1細胞培養(yǎng)2.1.1細胞復(fù)蘇-80℃冰箱中取出 BMSCs 及 LLC 細胞，投入 37℃水浴箱中水浴搖晃，至凍存液完全融化，75%酒精擦拭后送入超凈工作臺中，將管內(nèi)凍存液直接轉(zhuǎn)移至已預(yù)先裝有DMEM/F12 完全培養(yǎng)基（含 10%胎牛血清及 100 U/mL 青霉素+100 U/mL 鏈霉素雙抗）的培養(yǎng)瓶中，做好相應(yīng)標(biāo)記，5% CO2、37℃飽和濕度孵箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后換液。2.1.2細胞換液及傳代BMSCs 及 LLC 細胞于 5% CO2、37℃飽和濕度孵箱培養(yǎng)，每 2～3 d 換液。細胞匯合度約達 80%時，0.25% 胰蛋白酶對其消化傳代。傳代前先將 DMEM/F12 完全培養(yǎng)基（含 10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素+100 U/mL 鏈霉素）加入新培養(yǎng)瓶中，孵箱中取

黃芪多糖對肺癌細胞共培養(yǎng)體系中 BMSCs 增殖規(guī)律及 TAFs 相關(guān)分子表達的影響對肺癌微環(huán)境中BMSCs形態(tài)學(xué)的影響顯微鏡下觀察，如圖 7~9 所示，共培養(yǎng)第 6 天，48 h、72 h 換液及不MSCs 細胞為梭形，形態(tài)均一，排列有序；肺癌 LLC 細胞為梭形或圓；Co-BMSCs 組細胞形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，可見團簇狀生長；APS-C梭形，分布較均勻，偶見細長或團簇狀細胞。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]黃芩苷對支氣管哮喘的藥效學(xué)及其對苦味受體作用機制研究[D]. 楊超.河北醫(yī)科大學(xué) 2013
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本文編號：3254848