目的和背景:食管癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,其發(fā)病率位于全球惡性腫瘤發(fā)病率的第八位,死亡率位于第六位。在食管癌進(jìn)展過程中,許多信號通路中的激酶發(fā)生變化并進(jìn)行調(diào)節(jié)。90-kDa核糖體S6激酶（RSK1-4）是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族,參與轉(zhuǎn)錄、翻譯、細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞存活。RSK的表達(dá)和激活在乳腺癌、前列腺癌和肺癌等多種惡性腫瘤中均存在失調(diào),RSK已被報道可能是一種有前途的癌癥治療靶點(diǎn)。SL0101及其類似物等是已報道的RSK抑制劑,雖然他們在乳腺癌中具有生長抑制作用但是在非小細(xì)胞肺癌中也被證明具有促進(jìn)侵襲的作用。因此,尋找更有效的RSK抑制劑仍然十分重要。已有研究表明,醌類化合物具有抗皰疹、抗登革熱和抗腫瘤等多種藥理活性。拉帕醇又名黃鐘花醌,最初是從南美洲的天然產(chǎn)物的TabebuliaAvellanedae中提取出來,屬于萘醌類化合物并且具有抗炎、抗病毒和抗癌的作用。有研究報道拉帕醇通過靶向丙酮酸激酶M2（PKM2）抑制黑色素瘤細(xì)胞的生長,拉帕醇通過靶向DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和Ⅱ抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長。然而,拉帕醇在食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal squamous cell car... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?（Ａ）拉帕醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果???Ｄ??ｓｈＣｏｎｔｒｏｌ?ｓｈＲＳＫ２＃３?ｓｈＲＳＫ２＃４??ＫＹＳＥ４５０?ｐｉ：．：．．．．．．－．．．．．．．．．．．．?￣??ｉ?云除＇°?ｌ．??？ｍｍ???－??＊?［ｆｉｈｉｉｎｉｉｉｉｉ－－?．．?＊?ｒ?－?１??Ｏ知??〇?＝?１２０?１??８０：?■??ｆｌ＞?°?Ｔ??ｆｌ?ＬＪＩＨＬＪＢＭＬ－ＩＨＩ＿＿??ｚ?ｕ??ｓｈＲＳＫ２?．?＃３?＃４??ｓｈＣｏｎｔｒｏｌ?ｓｈＲＳＫ２＃３?ｓｈＲＳＫ２＃４??ＫＹＳＥ５１０?ｐ？－｜?—￣ｍｍ??ｉｆ?＿＿ＬＪ??８＝１２０！??�。小＃�?■?＊?＊??■?Ｊｉｉ．．．＿．．．．．．．．．．??ｓｈＲＳＫ２?■?＃３?＃４??圖２核糖體Ｓ６激酶是ＥＳＣＣ的一個治療靶點(diǎn)。（Ａ）磷酸化ＲＳＫ在食管細(xì)胞和食管鱗??癌細(xì)胞系中的表達(dá)。鋪細(xì)胞并孵育４８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測ＲＳＫ、ｐ－ＲＳＫ和ｐ－ＨｉｓｔｏｎｅＨ３??的表達(dá)。（Ｂ）下調(diào)ＲＳＫ２之后對ＲＳＫ信號通路的影響。建立ｓｈＲＳＫ２細(xì)胞系，然后Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測ＲＳＫ２及其下游蛋白分子的表達(dá)。（Ｃ和Ｄ）敲低ＲＳＫ２抑制ＥＳＣＣ細(xì)胞的生??長。細(xì)胞生長通過ＭＴＴ和ｓｏｆｔａｇａｒ?qū)嶒?yàn)檢測。數(shù)據(jù)的均值和方差來自三次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，＊表??示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ｐ＜〇．〇５）。條帶的灰度值，通過Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件計算。??ｓｈＣｏｎｔｒｏｌ?＋?－?－?？?－??ｓｈＲＳＫ２?？?＃１?＃２?＃３?＃４??ＲＳＫ２?｜??＾－Ａｃｔｉｎ?ｊ??２６??

）?－?１０?２０?Ｌａｐａｃｈｏｌ?（｜ｘＭ）?？?１０?２０??Ｃｙｃｌｉｎ?Ｂ１?丨?＿?Ｉ—？?鑛］?ＣＤＫ２?釋馬??ｒ〇?０：９?０．５?Ｊ?＇?１．ｃｆ—：一＂ｌ．１?＇…０．７—Ｊ??—匿憂—Ｄ?ｓ圓曙＜??１．０?０．８?０．２?１．０?１．２?１．６??Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１?個?Ｐ＾Ｓｔ〇％＾?｜?一?一?二??１．０?１．０?０．Ｓ??ｐ（？ｉＤ６Ｋ〇）?ｐ－Ａｃｔｉｎ?ｉ?丨丨丨：：二’??１．０?０．８?０．２?１．０?１．０?１．０??圖３拉帕醇抑制食管鱗癌細(xì)胞的生長。（Ａ）拉帕醇對ＥＳＣＣ細(xì)胞株錨定依賴性生長的作??用。ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ４５０和ＫＹＳＥ５１０細(xì)胞處理不同劑量的拉帕醇４８ｈ，?５７０ｎｍ測細(xì)胞的吸??光度，檢測細(xì)胞的生長。（Ｂ）拉帕醇對細(xì)胞錨定非依賴性生長的抑制作用。ＫＹＳＥ４５０和??ＫＹＳＥ５１０細(xì)胞給予不同劑量的拉帕醇，處理時間兩周。用顯微鏡拍照和Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ?ＰＬＵＳ軟??件計算克隆的數(shù)量。（Ｃ）拉帕醇對細(xì)胞周期蛋白的影響。ＫＹＳＥ３０細(xì)胞用不同劑量的拉帕醇??處理４８?ｈ，并且用含有２％血清的培養(yǎng)基。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測周期蛋白。所有數(shù)據(jù)均以平均值??士標(biāo)準(zhǔn)差表示，每個實(shí)驗(yàn)都有三份重復(fù)樣本。＊代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義＜１９．０５）。條帶的灰??度值，通過Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件計算。??３．４拉帕醇對ＥＳＣＣ細(xì)胞株生長的抑制作用依賴于ＲＳＫ２的表達(dá)??為了探索拉帕醇對細(xì)胞生長的抑制作用，是否依賴于ＲＳＫ２蛋白的表達(dá)。??ｓｈＲＳＫ２＃４和ｓｈＣｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞分別處理不同劑量的拉帕醇４８?ｈ，ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)??胞的生長情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，


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