研究背景:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）陽性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者標準化化療方案中出現(xiàn)的化療耐藥會導致疾病出現(xiàn)不良預后。因而,亟待深入研究HBV⁺HCC耐藥機制。闡明其耐藥的分子機制以及開發(fā)新的關鍵治療靶點,將為患者提供新的治療策略。方法:構建兩組對阿霉素（doxorubicin,DOX）有抗性的HBV陽性肝細胞癌細胞系HepG2.2.15和Huh7-1.3。采用實時熒光定量PCR（qPCR）技術分析體外培養(yǎng)的HBV⁺HCC化療敏感性和耐藥細胞系中己糖胺通路基因的表達,蛋白免疫印跡（Western blots）、熒光素酶報告基因分析和體內(nèi)種瘤技術,進一步研究揭示miRNA-325-3p/DPAGT1軸在HBV⁺HCC化療抗性中的作用。結果:長醇磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖磷酸轉移酶1（dolichyl-phosphate N-acetylglucosamine phosphotransferase 1,DPAGT1）在兩種耐藥肝癌細胞系中表達水平均... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學院安徽省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

證明DPAGT1在DOX耐藥HCC細胞中的過表達水平（A）用不同濃度的DOX處理HepG2.2.15和Huh7-1.3細胞，48小時后，測定細胞存活率以確定化學敏感性，產(chǎn)生了HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R細胞系

21圖2.DPAGT1介導的體內(nèi)/體外HCC耐藥性表達水平（A）Westernblot（B）免疫熒光，DPAGT1干擾對HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R的影響，比例尺：20μm。（C）對用DOX（1μM）處理48小時的細胞進行CCK-8分析（D）半胱天冬酶活性進行凋亡分析。DPAGT1敲低及其對DOX-R耐藥細胞的影響（E）免疫熒光，在MHCC-97H細胞中過表達DPAGT1-V264G或DPAGT1-Y170C（比例尺：20μm）。（F）CCK8（G）細胞凋亡，對MHCC-97H化學敏感性的影響。（H）DPAGT1敲低對Huh7-1.3DOX-R異種移植腫瘤生長的影響（每組n=9）。（I、J）Ki67和caspase-3的染色，比例尺：100μm。（K）在DOX和衣霉素的情況下MHCC-97H來源的異種移植腫瘤的生長（n=9只小鼠）。（J、M）Ki67和CC-3IHC染色。*P<0.05，**P<0.01。

243.4miR-325-3p逆轉體內(nèi)/體外HBV+HCC細胞中DPAGT1對DOX-R的作用過表達miR-325-3p細胞對DOX的化學敏感性顯著增加，抑制miR-325-3p后DOX-R細胞對DOX的化學敏感性降低（圖4A-B）�？筸iR-325-3p恢復DPAGT1表達后，化學抗性的抑制作用減少。（圖4A-B）。為了驗證miR-325-3p在體內(nèi)對DOX化學敏感性的進展，在模擬miR-325-3p的小鼠模型中，觀察到腫瘤組織中miR-325-3p表達水平顯著升高(圖4C)，腫瘤生長受到部分抑制(圖4D)。腫瘤生長曲線顯示，加入miR-325-3p模擬物的Huh7-1.3/DOX-R細胞DOX敏感性顯著增加（圖4D），同時顯示出細胞增殖減少和凋亡增加（圖4E-F）。這些結果證明了miR-325-3p在逆轉HBV+HCC化學耐藥性中的作用。


本文編號：3236179