惡性黑色素瘤（Malignant Melanoma,MM）起源于黑色素細(xì)胞,是所有皮膚癌癥中最具侵略性的一種,臨床表現(xiàn)預(yù)后差、致死率高,尤其是發(fā)生Ⅳ期轉(zhuǎn)移的黑素瘤患者5年生存率僅為16%,其中位生存時(shí)間僅為6-10個(gè)月。最近40年來,黑素瘤的發(fā)病率一直在不斷攀升,與之前相比增長了15倍,因此有必要對黑素瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究,以期發(fā)現(xiàn)更多黑素瘤特異的分子靶標(biāo)開展早期診斷和藥物研發(fā)�；诒緦�(shí)驗(yàn)室前期工作構(gòu)建的人黑素細(xì)胞和三種人黑素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,我們篩選出一批與黑素瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因,胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5（Insulin-like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5）是其中差異表達(dá)最顯著的基因之一。目前,尚未見IGFBP5基因在人類黑素瘤中功能研究的報(bào)道。本研究觀察了IGFBP5在黑素瘤細(xì)胞和組織中的表達(dá)規(guī)律,結(jié)合體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)和RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,系統(tǒng)研究了該基因與腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)系,并進(jìn)一步探討其在黑素瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用的分子機(jī)制。本研究在黑素瘤細(xì)胞A375和A2058中構(gòu)建了IGFBP5基因過表達(dá)與... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院北京基因組研究所)北京市

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【學(xué)位級別】：博士

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致謝
摘要
Abstract
專業(yè)詞匯中英文對照表
引言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 黑色素瘤的研究進(jìn)展
        1.1.1 黑素瘤發(fā)病的分子基礎(chǔ)
        1.1.2 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        1.1.3 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及腫瘤干細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用
        1.1.4 低氧誘導(dǎo)因子(HIF)在黑素瘤中的作用研究
        1.1.5 黑素瘤治療研究進(jìn)展
    1.2 IGFBP5在腫瘤中的研究進(jìn)展
第2章 材料和方法
    2.1 方法與技術(shù)流程圖
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞系和臨床樣品
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2.3 質(zhì)粒載體
        2.2.4 Western blot、免疫熒光及免疫組化所用抗體
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 IGFBP5基因及蛋白表達(dá)水平的檢測
        2.3.2 過表達(dá)IGFBP5和利用shRNA沉默IGFBP5穩(wěn)定細(xì)胞系的建立
        2.3.3 細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡特性的探究
        2.3.4 細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)的體外探究
        2.3.5 IGFBP5對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)進(jìn)程和腫瘤干細(xì)胞的影響
        2.3.6 人腫瘤細(xì)胞SCID-beige小鼠原位成瘤移植模型的建立和統(tǒng)計(jì)
        2.3.7 人腫瘤細(xì)胞SCID-beige小鼠移植模型肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 IGF1R受體及下游細(xì)胞信號通路的研究
        2.3.9 利用ION-Proton平臺對IGFBP5穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行RNA-Seq文庫的構(gòu)建、模板的建立和上機(jī)測序
        2.3.10 利用生物信息學(xué)方法對IGFBP5過表達(dá)和基因敲低轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行基因功能聚類和信號通路分析
第3章 結(jié)果與討論
    3.1 IGFBP5表達(dá)在人惡性黑素瘤細(xì)胞和組織中的表達(dá)呈差異性
    3.2 IGFBP5抑制惡性黑素瘤的生長
        3.2.1 IGFBP5抑制細(xì)胞增殖和降低細(xì)胞克隆形成能力
        3.2.2 IGFBP5阻滯細(xì)胞周期在G1期和促進(jìn)細(xì)胞凋亡
        3.2.3 IGFBP5降低在聯(lián)合重癥免疫缺陷小鼠(SCID-Beige mice)移植瘤模型中的細(xì)胞成瘤能力
    3.3 體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)表明IGFBP5抑制了惡性黑素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力
        3.3.1 IGFBP5能夠抑制惡性黑素瘤細(xì)胞的遷移和侵襲
        3.3.2 IGFBP5能夠抑制SCID-beige小鼠移植瘤模型肺轉(zhuǎn)移的能力
    3.4 IGFBP5抑制黑素瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(EMT)
        3.4.1 過表達(dá)IGFBP5抑制黑素瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化并降低腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞樣特性
        3.4.2 敲低IGFBP5表達(dá)促進(jìn)EMT發(fā)生并增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞樣特性
    3.5 IGFBP5蛋白通過抑制IGF1R-ERK信號通路和P38-MAPK信號通路來發(fā)揮作用
    3.6 IGFBP5蛋白過表達(dá)會降低低氧誘導(dǎo)因子HIF1α蛋白及下游因子的表達(dá)
    3.7 IGFBP5過表達(dá)和基因沉默的RNA-seq轉(zhuǎn)錄組分析
        3.7.1 轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)譜分析
        3.7.2 基因功能聚類
        3.7.3 IPA信號通路分析
    3.8 工作展望
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A
作者簡介及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Functional roles and clinical values of insulin-like growth factor-binding protein-5 in different types of cancers[J]. Gke Güllü,Sevgi Karabulut,Mustafa Akkiprik.  癌癥. 2012(06)



本文編號：3207799