目的:作為凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族的兩個重要成員,survivin和X連鎖凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）在包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的眾多腫瘤組織中顯著高表達(dá),參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展的眾多生物學(xué)過程,一直被認(rèn)為是腫瘤治療的潛在靶標(biāo)。既往研究報道,survivin可以與XIAP形成IAP-IAP復(fù)合物,使XIAP穩(wěn)定,進而協(xié)同抑制Caspase 9的活性、發(fā)揮抗凋亡作用。因此,本研究旨在開發(fā)一種全新的靶向survivin-XIAP復(fù)合物的抗腫瘤多肽并探索其在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的抗腫瘤機制。研究方法:1、利用在線數(shù)據(jù)庫Oncomine和GEPIA分析IAPs在包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的多種腫瘤組織及正常組織中的表達(dá);2、設(shè)計并合成靶向survivin-XIAP復(fù)合物的抗腫瘤多肽Sur-X,Con作為陰性對照;3、免疫共沉淀法檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞中survivinXIAP復(fù)合物的形成以及Sur-X對survivin和XIAP結(jié)合的影響;4、利用MTT法、集落形成實驗檢測Sur-X對結(jié)直... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :設(shè)計靶向結(jié)直腸癌細(xì)胞中Survivin-XIAP復(fù)合物的抗腫瘤多肽Sur-X
    1前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 在線數(shù)據(jù)分析
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 蛋白免疫印跡(Western blot)
            2.2.4 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)
            2.2.5 共聚焦顯微鏡成像
            2.2.6 MTT法檢測細(xì)胞活力
            2.2.7 集落形成實驗
            2.2.8 裸鼠皮下移植瘤+瘤內(nèi)注射模型
            2.2.9 裸鼠皮下移植瘤+靜脈注射模型
            2.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Survivin和 XIAP在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)
        3.2 設(shè)計靶向結(jié)直腸癌細(xì)胞中Survivin-XIAP復(fù)合物的多肽Sur-X
        3.3 Sur-X可特異、有效地抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞生長
        3.4 Sur-X顯著抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤生長而無明顯的毒性作用
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :Sur-X促進結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和程序性壞死
    6前言
    7 材料與方法
        7.1 主要試劑和儀器
            7.1.1 主要試劑
            7.1.2 主要儀器
        7.2 實驗方法
            7.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            7.2.2 實時凋亡&壞死檢測
            7.2.3 Caspase3 活性檢測
            7.2.4 蛋白免疫印跡(Western blot)檢測蛋白水平
            7.2.5 q RT-PCR檢測m RNA表達(dá)
            7.2.6 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性檢測
            7.2.7 免疫共沉淀(Co-IP)
            7.2.8 Annexin V/7-AAD流式檢測
            7.2.9 瑞士-吉姆薩染色
            7.2.10 分子動力模擬預(yù)測Sur-X與 XIAP的結(jié)合位點
            7.2.11 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            7.2.12 MTT檢測細(xì)胞活力
            7.2.13 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
            7.2.14 免疫組織化學(xué)染色
            7.2.15 TUNEL染色
            7.2.16 統(tǒng)計學(xué)分析
    8 結(jié)果
        8.1 Sur-X通過靶向Survivin-XIAP復(fù)合物、促進Survivin和 XIAP降解,誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡
            8.1.1 Sur-X誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生內(nèi)源性凋亡
            8.1.2 Sur-X促進結(jié)直腸癌細(xì)胞中Survivin和 XIAP降解
            8.1.3 Sur-X對 XIAP與 Caspase9 之間的相互作用無明顯影響
            8.1.4 Z-VAD僅部分逆轉(zhuǎn)Sur-X誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞死亡
        8.2 Sur-X干擾XIAP和 TAB1 之間的相互作用、加速TAK1 降解,促進結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死
            8.2.1 Sur-X使結(jié)直腸癌細(xì)胞快速喪失細(xì)胞膜完整性
            8.2.2 Sur-X促進結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死
            8.2.3 Sur-X抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞中XIAP與 TAB1 之間的相互作用
            8.2.4 Sur-X促進結(jié)直腸癌細(xì)胞中TAK1 降解,降低TAK1、p-TAK1 的表達(dá)
            8.2.5 TAK1抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死
            8.2.6 敲減TAK1 可恢復(fù)TAB1-OE細(xì)胞對Sur-X誘導(dǎo)的程序性壞死的敏感性
            8.2.7 Sur-X僅引起NF-κB信號通路的短暫激活
        8.3 Sur-X在裸鼠體內(nèi)同時誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和程序性壞死
    9 討論
    10 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]增強采樣分子動力學(xué)模擬在生物分子研究中的進展（英文）[J]. 王安輝,張志超,李國輝.  Chinese Journal of Chemical Physics. 2019(03)
[2]TRAF3 Interacts with Smac/DIABLO and Enhances the Proapoptotic Effect of Smac/DIABLO in Cytoplasm[J]. Cuili ZHANG~(1,2);Lei XIE~4;Hai’en CHENG~3;and Yingxiong WANG~2 ~1Clinical Laboratory,Sichuan Corps Hospital of The people’s Armed Police Forces,Leshan 614000,China;~2Department of Procreation Medicine,Chongqing Medical Universtity,Chongqing 400016,China;~3Clinical Laboratory,Second Affiliated Hospital Zhejiang University College of Medicine,Hangzhou 310009,China;~4Sitchuan Corps Hospital The People’s Armed Police Forces,Leshan 614000,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(02)



本文編號：3207733