本文關鍵詞：增強型ARMS PCR檢測腦膠質瘤中IDH1基因突變方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的腦膠質瘤中異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)基因突變狀態(tài)與患者預后及治療密切相關,IDH1基因突變90%發(fā)生在R132位點。該位點突變較未突變的患者生存期顯著提高,并對替莫唑胺的敏感性增強。臨床檢測IDH1基因突變常采用直接測序法(ARMS PCR),但突變比例低于20%的標本易被忽略。故本課題建立了較ARMS PCR更有效的增強型ARMS PCR檢測方法。方法 (1)構建IDH1野生型和R132H位點突變陽性質粒標準品。(2)設計IDH1基因R132H位點突變引物和Taqman探針引物,按突變質粒標準品占野生質粒標準品的比例進行梯度稀釋,運用增強型ARMS PCR法檢測敏感性;將野生質粒標準品梯度稀釋,增強型ARMS PCR法檢測非特異性擴增CT值與內參CT值,評價特異性。(3)提取腦膠質瘤石蠟包埋組織DNA,ARMS PCR法和增強型ARMS PCR法檢測R132H位點突變情況,比較二者的符合率和Kappa值。結果 (1)成功構建IDH1野生型和R132H位點突變質粒標準品。(2)設計四條增強型ARMS PCR引物:一對特異性突變ARMS引物,非人源接頭引物和Taqman探針引物;敏感性檢測突變DNA可至0.05%;特異性檢測在50 ng相對高質量的野生質粒背景下,檢測R132H位突變未見非特異性擴增。(3)兩種檢測結果符合率為100%,Kappa=1。結論增強型ARMS PCR法檢測腦膠質瘤中IDH1基因突變有敏感性高、特異性強、簡單快捷的特點,可在臨床推廣使用。
【作者單位】： 鄭州大學基礎醫(yī)學院藥理學系;
【關鍵詞】： IDH 腦膠質瘤 增強型ARMS PCR 非人源接頭 Taqman探針
【分類號】：R739.41
【正文快照】： 增強型ARMS PCR檢測腦膠質瘤中IDH1基因突變方法的建立@曹丹華$鄭州大學基礎醫(yī)學院藥理學系!河南鄭州450001 @高盼惠$鄭州大學基礎醫(yī)學院藥理學系!河南鄭州450001 @怡然$鄭州大學基礎醫(yī)學院藥理學系!河南鄭州450001 @胡香杰$鄭州大學基礎醫(yī)學院藥理學系!河南鄭州450001 @

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