研究背景幽門螺桿菌感染易引起慢性胃炎和消化性潰瘍,被認(rèn)為是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的Ⅰ類致病菌。幽門螺桿菌的致病性主要歸因于它的各種毒力因子,其中最廣泛研究的是細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白CagA。CagA可被細(xì)菌編碼的Ⅳ型分泌系統(tǒng)注射入細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞中激活多種信號分子,其中包括炎癥因子NF-κB。NF-κB被激活后,可在細(xì)胞中發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng),如炎性,細(xì)胞永生化,細(xì)胞增殖,抗凋亡,血管新生,腫瘤轉(zhuǎn)移等。NF-κB發(fā)揮生物學(xué)功能的分子機制之一是:NF-κB可引起細(xì)胞中的關(guān)鍵miRNAs表達(dá)失調(diào),這些miRNAs的失調(diào)又可引起下游靶蛋白的異常表達(dá),進(jìn)而引起以上生物學(xué)效應(yīng),促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。幽門螺桿菌毒力因子CagA在胃黏膜上皮細(xì)胞激活NF-κB后,NF-κB通過調(diào)控哪些miRNAs的表達(dá)來促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展的,目前尚未見報道。我們通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn):幽門螺桿菌感染胃黏膜上皮細(xì)胞后,通過miRNAs芯片篩選到31種差異性表達(dá)的miRNAs,其中miR-223-3p是唯一一種表達(dá)上調(diào)的miRNA。軟件分析發(fā)現(xiàn):miR-223-3p啟動子區(qū)存在NF-κB的結(jié)合位點。基于以上研究成果和分析,本研究擬探討以下問題:NF... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?ｍｉＲ－２２３－３ｐ促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和遷移??

圖４?ｍｉＲ－２２３－３ｐ直接靶向ＡＲＩＤＩＡ?３’ＵＴＲ并下調(diào)其表達(dá)???Ｂ?胃癌細(xì)胞?ＢＧＣ－８２３?和?ＳＧＣ－７９０１?轉(zhuǎn)染?ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ，?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂ和ｑＲＴ－ＰＣＲ分別檢測ＡＲＩＤＩＡ蛋白（Ａ）和ｍＲＮＡ?（Ｂ）表達(dá)水平???Ｄ?胃癌細(xì)胞?ＢＧＣ－８２３?和?ＳＧＣ－７９０１?轉(zhuǎn)染?ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ｗｅｓｔｅｒｎ和ｑＲＴ－ＰＣＲ分別檢測ＡＲＩＤＩＡ蛋白（Ｃ）和ｍＲＮＡ?（Ｄ）表達(dá)水平??構(gòu)建ｐＭＩＲ－ＡＲＩＤｌＡ３＇ＵＴＲ熒光素酶報告基因載體示意圖（ＷＴ表示野生Ｍｕｔ表示突變型）??－２）胃癌細(xì)胞ＢＧＣ－８２３和ＳＧＣ－７９０１共轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ和野生型變型ｐＭＩＲ－ＡＲＩＤＩＡ?３＇ＵＴＲ質(zhì)粒，４８ｈ后進(jìn)行熒光素酶活性檢測??

圖５?ｍｉＲ－２２３－３ｐ通過ＡＲＩＤ１Ａ促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和遷移??Ａ胃癌細(xì)胞ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達(dá)質(zhì)粒??（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ）?，?ＥｄＵ檢測細(xì)胞增殖能力??Ｂ統(tǒng)計學(xué)分析ＥｄＵ陽性細(xì)胞數(shù)??Ｃ胃癌細(xì)胞ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達(dá)質(zhì)粒??（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ），Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ?檢測細(xì)胞迀移能力??Ｄ統(tǒng)計學(xué)分析Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ穿膜細(xì)胞數(shù)??Ｅ胃癌細(xì)胞ＢＧＣ－８２３和ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達(dá)質(zhì)粒，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測?ＡＲＩＤ?１Ａ、ｐ２１、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ?表達(dá)水平??Ｆ胃癌細(xì)胞ＳＧＣ－７９０１共轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ過表達(dá)質(zhì)粒（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ）和??ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ，ＥｄＵ檢測細(xì)胞增殖能力??Ｇ統(tǒng)計學(xué)分析ＥｄＵ陽性細(xì)胞數(shù)??


本文編號：3128467