研究背景幽門螺桿菌感染易引起慢性胃炎和消化性潰瘍,被認為是導致胃癌發(fā)生的Ⅰ類致病菌。幽門螺桿菌的致病性主要歸因于它的各種毒力因子,其中最廣泛研究的是細胞毒素相關(guān)基因蛋白CagA。CagA可被細菌編碼的Ⅳ型分泌系統(tǒng)注射入細胞內(nèi),在細胞中激活多種信號分子,其中包括炎癥因子NF-κB。NF-κB被激活后,可在細胞中發(fā)揮多種生物學效應,如炎性,細胞永生化,細胞增殖,抗凋亡,血管新生,腫瘤轉(zhuǎn)移等。NF-κB發(fā)揮生物學功能的分子機制之一是:NF-κB可引起細胞中的關(guān)鍵miRNAs表達失調(diào),這些miRNAs的失調(diào)又可引起下游靶蛋白的異常表達,進而引起以上生物學效應,促進腫瘤發(fā)生發(fā)展。幽門螺桿菌毒力因子CagA在胃黏膜上皮細胞激活NF-κB后,NF-κB通過調(diào)控哪些miRNAs的表達來促進胃癌發(fā)生發(fā)展的,目前尚未見報道。我們通過文獻檢索發(fā)現(xiàn):幽門螺桿菌感染胃黏膜上皮細胞后,通過miRNAs芯片篩選到31種差異性表達的miRNAs,其中miR-223-3p是唯一一種表達上調(diào)的miRNA。軟件分析發(fā)現(xiàn):miR-223-3p啟動子區(qū)存在NF-κB的結(jié)合位點�；谝陨涎芯砍晒头治�,本研究擬探討以下問題:NF... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?ｍｉＲ－２２３－３ｐ促進胃癌細胞增殖和遷移??

圖４?ｍｉＲ－２２３－３ｐ直接靶向ＡＲＩＤＩＡ?３’ＵＴＲ并下調(diào)其表達???Ｂ?胃癌細胞?ＢＧＣ－８２３?和?ＳＧＣ－７９０１?轉(zhuǎn)染?ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ，?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂ和ｑＲＴ－ＰＣＲ分別檢測ＡＲＩＤＩＡ蛋白（Ａ）和ｍＲＮＡ?（Ｂ）表達水平???Ｄ?胃癌細胞?ＢＧＣ－８２３?和?ＳＧＣ－７９０１?轉(zhuǎn)染?ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ｗｅｓｔｅｒｎ和ｑＲＴ－ＰＣＲ分別檢測ＡＲＩＤＩＡ蛋白（Ｃ）和ｍＲＮＡ?（Ｄ）表達水平??構(gòu)建ｐＭＩＲ－ＡＲＩＤｌＡ３＇ＵＴＲ熒光素酶報告基因載體示意圖（ＷＴ表示野生Ｍｕｔ表示突變型）??－２）胃癌細胞ＢＧＣ－８２３和ＳＧＣ－７９０１共轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ和野生型變型ｐＭＩＲ－ＡＲＩＤＩＡ?３＇ＵＴＲ質(zhì)粒，４８ｈ后進行熒光素酶活性檢測??

圖５?ｍｉＲ－２２３－３ｐ通過ＡＲＩＤ１Ａ促進胃癌細胞增殖和遷移??Ａ胃癌細胞ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達質(zhì)粒??（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ）?，?ＥｄＵ檢測細胞增殖能力??Ｂ統(tǒng)計學分析ＥｄＵ陽性細胞數(shù)??Ｃ胃癌細胞ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達質(zhì)粒??（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ），Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ?檢測細胞迀移能力??Ｄ統(tǒng)計學分析Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ穿膜細胞數(shù)??Ｅ胃癌細胞ＢＧＣ－８２３和ＳＧＣ－７９０１轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ?ｓｉＲＮＡ或ＡＲＩＤ１Ａ過表達質(zhì)粒，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測?ＡＲＩＤ?１Ａ、ｐ２１、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ?表達水平??Ｆ胃癌細胞ＳＧＣ－７９０１共轉(zhuǎn)染ＡＲＩＤ１Ａ過表達質(zhì)粒（ｐｃＤＮＡ６．０－ＡＲＩＤｌＡ）和??ｍｉＲ－２２３－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ，ＥｄＵ檢測細胞增殖能力??Ｇ統(tǒng)計學分析ＥｄＵ陽性細胞數(shù)??


本文編號：3128467