目的:本項(xiàng)目擬探討緊密連接蛋白CLDN6通過Tyk2（tyrosine-protein kinase 2）/Stat3（Signal transducers and activators of transcription 3）信號通路調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞sw1116遷移與侵襲的作用,為結(jié)腸癌治療和控制轉(zhuǎn)移提供新的靶點(diǎn)。方法:Western-Blot技術(shù)檢測過表達(dá)CLDN6蛋白的結(jié)腸癌sw1116細(xì)胞中Tyk2以及Stat3總蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)水平;MTT法檢測酪氨酸激酶抑制劑AG490對過表達(dá)CLDN6的sw1116細(xì)胞的最大安全劑量;Western-Blot技術(shù)檢測AG490抑制Stat3磷酸化的最佳作用濃度和最佳作用時(shí)間;劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測AG490對過表達(dá)CLDN6的sw1116細(xì)胞體外遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果:與空載組相比,過表達(dá)CLDN6的sw1116細(xì)胞克隆組中Tyk2及Stat3的磷酸化水平明顯升高;AG490抑制Stat3磷酸化的最適濃度和時(shí)間分別為50μM和48h;AG490處理克隆組細(xì)胞后,與對照組相比,過表達(dá)CLD... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
縮略詞
引言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 CLDNs結(jié)構(gòu)與功能簡介
    1.2 CLDNs家族的分布
    1.3 CLDNs在腫瘤中的表達(dá)及功能研究
        1.3.1 呼吸系統(tǒng)中CLDNs的表達(dá)
        1.3.2 消化系統(tǒng)中CLDNs的表達(dá)
        1.3.3 生殖系統(tǒng)中CLDNs的表達(dá)
        1.3.4 乳腺癌與CLDNs的表達(dá)
    1.4 CLNDs的相關(guān)信號通路研究
        1.4.1 CLDNs與MAPKs以及PI3K/Akt相關(guān)信號通路的研究
        1.4.2 CLDNs與Jaks/Stats相關(guān)信號通路的研究
    1.5 展望和挑戰(zhàn)
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要耗材與試劑
        2.1.3 主要設(shè)備與儀器
        2.1.4 主要試劑配制
        2.1.5 抗體稀釋倍數(shù)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 Western-Blot鑒定CLDN6表達(dá)與Tyk2/stat3表達(dá)的關(guān)系
        2.2.3 MTT技術(shù)鑒定AG490對sw1116細(xì)胞的IC50
        2.2.4 Western-Blot鑒定AG490抑制stat3磷酸化的最佳作用條件
        2.2.5 AG490對細(xì)胞遷移能力的影響
        2.2.6 AG490對細(xì)胞侵襲能力的影響
    2.3 統(tǒng)計(jì)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 CLDN6的表達(dá)對Tyk2/stat3信號通路活化的影響
    3.2 MTT技術(shù)鑒定AG490對sw1116細(xì)胞的IC50
    3.3 Western-Blot方法檢測AG490的最佳作用濃度以及最佳作用時(shí)間
        3.3.1 AG490處理的最佳作用濃度
        3.3.2 AG490處理的最佳作用時(shí)間
    3.4 AG490對克隆組細(xì)胞形態(tài)的影響
    3.5 AG490對克隆組細(xì)胞遷移與侵襲能力的影響
        3.5.1 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測AG490對克隆組細(xì)胞遷移能力的影響
        3.5.2 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測AG490對克隆組細(xì)胞遷移能力的影響
        3.5.3 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測AG490對克隆組細(xì)胞侵襲能力的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在讀期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Claudin 1 mediates tumor necrosis factor alpha-induced cell migration in human gastric cancer cells[J]. Atsushi Shiozaki,Hiroki Shimizu,Daisuke Ichikawa,Hirotaka Konishi,Shuhei Komatsu,Takeshi Kubota,Hitoshi Fujiwara,Kazuma Okamoto,Daisuke Iitaka,Shingo Nakashima,Yoshito Nako,Mingyao Liu,Eigo Otsuji.  World Journal of Gastroenterology. 2014(47)

博士論文
[1]過表達(dá)claudin-6對乳腺癌細(xì)胞MCF-7生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的研究[D]. 吳瓊.吉林大學(xué) 2010

碩士論文
[1]緊密連接蛋白CLDN6對結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116惡性表型的抑制作用[D]. 王敏.吉林大學(xué) 2014
[2]MCF-7細(xì)胞中CLDN6靶基因的篩選及CLDN6通過Tyk-2/Stats通路影響MCF-7細(xì)胞的惡性表型[D]. 張婷.吉林大學(xué) 2012



本文編號：3093301