RhoGTP酶家族是肌動(dòng)蛋白骨架的關(guān)鍵調(diào)控因子,是一類GTP/GDP分子開(kāi)關(guān)蛋白,結(jié)合GTP時(shí)為活化狀態(tài),結(jié)合GDP時(shí)為失活狀態(tài)。RhoA是RhoGTP酶家族最具典型特征的成員之一。腫瘤抑制蛋白DLC1（Deleted in Liver Cancer 1）是RhoGAP（RhoGTPase-activating protein）家族成員之一,催化其下游靶蛋白R(shí)hoA從RhoA-GTP狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)镽hoA-GDP狀態(tài),使RhoA失活。DLC1蛋白在細(xì)胞內(nèi)不穩(wěn)定,在多種癌癥中低表達(dá)或缺失。一氧化氮（NO）和活性氧（ROS）在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮信號(hào)分子的功能,參與調(diào)控多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。NO由一氧化氮合酶（NOS）合成,在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)誘導(dǎo)蛋白質(zhì)亞硝基化（S-nitrosylation）調(diào)控一系列細(xì)胞生理進(jìn)程。亞硝基化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,通過(guò)一個(gè)NO基團(tuán)與半胱氨酸殘基上的反應(yīng)性的硫醇基團(tuán)結(jié)合,形成亞硝基硫醇（S-nitrosothiol）。有報(bào)道指出NO影響RhoA的活力。ROS調(diào)控成纖維細(xì)胞RhoA活力,該過(guò)程不依賴于RhoGEF或RhoGAP。ROS調(diào)控RhoGAP家族成員p190Rho-... 

【文章來(lái)源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

RhoGTPases下游靶分子[3]

位于DLC1的SAM結(jié)構(gòu)域和RhoGAP結(jié)構(gòu)域之間的富含絲氨酸的中間區(qū)域，是 DLC 家族保守程度最低的區(qū)域，該區(qū)域功能復(fù)雜[33-34, 38]。DLC1 通過(guò)其中間區(qū)域與粘著斑上的 tensin 的 SH2 結(jié)構(gòu)域（SH2 domain）和 PTB 結(jié)構(gòu)域（phosphotyrosine-binding domin）相互作用，影響癌細(xì)胞遷移[39-40]。DLC1 與整合素β3（integrin β3）相互競(jìng)爭(zhēng)，與 tensin1 的 PTB 結(jié)構(gòu)域結(jié)合。DLC1 分子上的442 酪氨酸位點(diǎn)對(duì)于 DLC1 與 tensin 的相互作用至關(guān)重要，酪氨酸 442 位點(diǎn)的點(diǎn)突變導(dǎo)致 DLC1 不能與 tensin 的 SH2 結(jié)構(gòu)域結(jié)合，影響 DLC1 的功能[40]。DLC1中間區(qū)域上存在一個(gè)與樁蛋白（paxillin）LD 基序（LD motifs）同源的 LD 樣基序（LD-like motifs），該 LD 樣基序包含 8 個(gè)氨基酸殘基（469LDDILYHV476），對(duì)于 DLC1 與踝蛋白（talin）和粘著斑激酶（FAK）的結(jié)合是必須的。LD 樣基序的突變導(dǎo)致 DLC1 不能與 talin 和 FAK 結(jié)合，影響 DLC1 在粘著斑的定位，并導(dǎo)致 DLC1 的腫瘤抑制功能受損[41]。

經(jīng)顯著性差異分析，150、200和 250μM 黃酮處理 MDA-MB-231 細(xì)胞 72 小時(shí)顯著抑制細(xì)胞增殖（P<0.05）（圖2-1D）。上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明，黃酮以劑量和時(shí)間依賴性的方式抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。4.2 黃酮誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡本研究通過(guò) Hoechst 33342-PI 核熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡和壞死。當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí)，染色質(zhì)發(fā)生固縮。Hoechst 33342 發(fā)藍(lán)色熒光，能穿過(guò)細(xì)胞膜。Hoechst 33342染色后，凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光強(qiáng)度高于正常細(xì)胞。PI（碘化丙啶）發(fā)紅色熒光，不能穿過(guò)細(xì)胞膜，所以不能染色正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。而當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí)，細(xì)胞膜喪失完整性，因此，PI 可以染色壞死細(xì)胞，發(fā)亮紅色熒光。Hoechst 33342-PI 核熒光染色后，正常細(xì)胞呈弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞呈強(qiáng)藍(lán)色熒光，壞死細(xì)胞呈強(qiáng)藍(lán)色熒光和強(qiáng)紅色熒光。統(tǒng)計(jì)凋亡細(xì)胞時(shí)，應(yīng)統(tǒng)計(jì)呈強(qiáng)藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)減去同時(shí)呈強(qiáng)藍(lán)色熒光和強(qiáng)紅色熒光的細(xì)胞數(shù)。濃度為的 200μM 黃酮分別處理乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞 24、48 和 72 小時(shí)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃酮類化合物的抗癌作用及作用機(jī)制[J]. 朱文振,馬龍,李國(guó)榮.  生命科學(xué). 2012(05)
[2]Anti-cancer effect of iNOS inhibitor and its correlation with angiogenesis in gastric cancer[J]. Guang-Yi Wang, Bai Ji, Xu Wang, Jian-Hua Gu, Department of General Surgery, the First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(25)



本文編號(hào)：3059418