發(fā)布時(shí)間：2021-02-23 03:39

　　原發(fā)性肝癌是指發(fā)生在肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤,其中肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）約占原發(fā)性肝癌發(fā)病率的90%。HCC病程具有進(jìn)展速度快、轉(zhuǎn)移率及復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn),是國內(nèi)外對于HCC的診治效果不理想的主要原因。中國作為肝癌的高發(fā)病率國家,患者人數(shù)仍在上升。截止目前為止,國內(nèi)外治療肝癌的手段主要包括手術(shù)、放化療以及肝移植、靶向治療、免疫治療、中醫(yī)藥治療等,但早期肝癌的主要治療手段仍以手術(shù)為主。而導(dǎo)致肝癌患者死亡的最主要和最常見的原因是術(shù)后復(fù)發(fā)。因此保持肝癌術(shù)后休眠狀態(tài),抑制其復(fù)發(fā),可有效地降低死亡率,從而提高生存期。目的:本課題預(yù)測肝癌細(xì)胞系SMMC7721中mi R-602表達(dá)的變化,可通過調(diào)節(jié)RASSF1A基因介導(dǎo)的磷酸化JNK信號通路促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的作用,從而影響肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)。方法:體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分:構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A的SMMC7721細(xì)胞系,在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行mimic及inhibitor mi R-602的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。通過檢測各細(xì)胞系中mi R-602、RASSF1A與p-JNK、JNK、ATF-2和c-JUN、p-C-JUN的表... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA的分子作用機(jī)制[26-28]

第二章miRNA-602通過靶向RASSF1A/JNK通路促進(jìn)HCC細(xì)胞生長的作用機(jī)制（體外實(shí)驗(yàn)）19二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.穩(wěn)轉(zhuǎn)RASSF1A的SMMC7721細(xì)胞系各實(shí)驗(yàn)組病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效果良好，熒光率達(dá)80%以上。感染復(fù)數(shù)MOI：30。篩選藥物及濃度：嘌呤霉素1.6μg/mL。藥物篩選時(shí)間：4天。轉(zhuǎn)導(dǎo)后藥篩獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株。a），b）過表達(dá)組-Pn+4-100xa)b)c），d）對照組-Pn+4-100xc)d)圖2-1穩(wěn)定表達(dá)RASSF1A基因的SMMC7721細(xì)胞系的熒光照片。(a，b)過表達(dá)組圖像。(c，d)對照組圖像。2.qPCR檢測hRASSF1A基因在過表達(dá)組中的表達(dá)量是對照組的4125.7%。根據(jù)相對定量的方法檢測目的基因的表達(dá)變化，按照2-ΔΔCT法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。樣品名稱hRASSF1A①hGAPDH②ΔCT(①-②)ΔΔCT（過表達(dá)組-對照組）2-ΔΔCT表達(dá)效率

華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文20過表達(dá)組16.54913.7082.842-5.36741.2574125.7%對照組21.89313.6858.20801100.0%a)b)圖2-2a)hRASSF1A和b)hGAPDH的溶解曲線第三節(jié)RASSF1A通過JNK信號通路抑制SMMC7721細(xì)胞的增殖一、實(shí)驗(yàn)耗材、試劑及方法1.實(shí)驗(yàn)耗材、試劑BCA蛋白濃度測定試劑盒、PMSF、100×蛋白酶抑制劑、細(xì)胞刮刀、PBS緩沖液、負(fù)壓吸引器、96孔板、酶標(biāo)儀、碧云天凝膠配制試劑盒、15ml離心管、蛋白電泳裝置、異丙醇、PVDF膜、脫脂奶粉、槍頭、離心管、0.6mlEP管2.主要實(shí)驗(yàn)方法取第二節(jié)中獲得的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A的SMMC7721細(xì)胞及正常的SMMC7721細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A的SMMC7721細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，正常的SMMC7721細(xì)胞作為對照組。待細(xì)胞繁殖至對數(shù)生長期時(shí)收集細(xì)胞進(jìn)行一下實(shí)驗(yàn)。1.1細(xì)胞總RNA的提取及濃度測定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝癌介入治療前后原癌基因Pokemon、甲胎蛋白異質(zhì)體、甲胎蛋白、脫γ-羧基凝血酶原聯(lián)合檢測的臨床價(jià)值[J]. 張全樂,邢喜芝,張立英,劉三香,李風(fēng)艷.  安徽醫(yī)藥. 2017(03)
[2]Managements of recurrent hepatocellular carcinoma after liver transplantation: A systematic review[J]. Nicola de’Angelis,Filippo Landi,Maria Clotilde Carra,Daniel Azoulay.  World Journal of Gastroenterology. 2015(39)
[3]健脾化瘀方促進(jìn)小鼠肝癌休眠的作用及其免疫機(jī)制研究[J]. 黃旭暉,張曉文,梁榮華,郭葦,陳燕鑾,王昌俊.  現(xiàn)代醫(yī)院. 2014(09)
[4]小鼠肝癌休眠模型的建立[J]. 黃旭暉,王昌俊,張曉文,林舉擇,付婷婷.  中華腫瘤防治雜志. 2013(19)
[5]JNK信號通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J]. 李佳殷,林麗珠.  實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志. 2012(18)
[6]原發(fā)性肝癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)microRNA的篩選及應(yīng)用[J]. 鄧治亮,孫建,區(qū)應(yīng)亮,侯寶華,簡志祥,區(qū)金銳.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2012(04)
[7]GSTP1和RASSF1A基因多態(tài)性和環(huán)境因素與前列腺癌的相關(guān)性分析[J]. 徐興興,常文軍,侯建國,徐丹楓,崔心剛,翟羽佳,王國萍,張宏偉,曹廣文.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(01)
[8]miRNA在HBV從感染經(jīng)由肝硬化到肝癌進(jìn)程中表達(dá)譜的變化[J]. 馬兆龍,楊煉,陳立波,黃金明,王冬冬,王國斌.  世界華人消化雜志. 2009(20)



本文編號：3046959