目的:探討富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白1（cysteine and glycine rich protein 1,CSRP1）基因過表達(dá)對人肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移的影響。方法:體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染PEX-2-CSRP1重組質(zhì)粒（過表達(dá)組）或PEX-2空載體（空質(zhì)粒組）,另設(shè)不做任何處理的HepG2細(xì)胞為空白組;通過Western blotting法檢測CSRP1基因的表達(dá);MTT法檢測0h,24h,48h,72h后HepG2細(xì)胞的增殖活性;流式細(xì)胞學(xué)檢測HepG2細(xì)胞凋亡。Transwell侵襲實驗檢測各組HepG2細(xì)胞侵襲性;細(xì)胞劃痕實驗檢測各組HepG2細(xì)胞遷移運(yùn)動能力變化。結(jié)果:1.Western blot實驗結(jié)果:轉(zhuǎn)染后48h,過表達(dá)組中HepG2細(xì)胞的CSRP1蛋白的表達(dá)水平顯著增高。半定量分析結(jié)果顯示:過表達(dá)組蛋白相對表達(dá)量為（0.224±0.0165）,明顯高于空白組（0.0723±0.0138）、空質(zhì)粒組（0.0730±0.0143）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）;2.MTT檢測結(jié)果:在三個不同時間段（24h、48h、72h）,過表達(dá)組... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot法檢測CSRP1蛋白表達(dá)GAPDH

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文184.3過表達(dá)CSRP1對HepG2細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞學(xué)檢測凋亡結(jié)果如下所示（4.5），各組轉(zhuǎn)染48h后凋亡率結(jié)果統(tǒng)計分析后顯示：過表達(dá)組48h凋亡率為（9.053±0.304）%，高于空白組（4.170±0.212）%、空質(zhì)粒組（5.097±0.309）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）；而空白組及空質(zhì)粒組凋亡率無明顯差異(p＞0.05)。提示過CSRP1可促進(jìn)HepG2細(xì)胞凋亡（見圖4.6）。A空白組B空質(zhì)粒組C過表達(dá)組圖4.5FCM法檢測細(xì)胞凋亡

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文20而空白組及空質(zhì)粒組穿膜數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。由此可見，CSRP1基因過表達(dá)后，HepG2細(xì)胞侵襲能力減弱(圖4.8)。4.5過表達(dá)CSRP1對HepG2細(xì)胞遷移影響如下圖所示（圖4.9），在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的遷移距離變化：在實驗時間段，三組劃痕均出現(xiàn)愈合，相對于空白組、空質(zhì)粒組，過表達(dá)組劃痕愈合速度減慢。隨機(jī)取5個視野測算出各組各個時間段遷移距離，取均值后統(tǒng)計分析提示（結(jié)果見表4.3）：在三個時間段（24h、48h、72h），過表達(dá)組細(xì)胞遷移距離為（1.620±0.111）μm、（2.660±0.707）μm、（3.640±0.230）μm，低于空白組（2.400±0.158）μm、（3.720±0.130）μm、（5.260±0.230）μm及空質(zhì)粒組（2.440±0.219）μm、（3.820±0.110）μm、（5.300±0.245）μm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。而空質(zhì)粒組及空白組細(xì)胞遷移距離無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05）。提示過表達(dá)CSRP1基因，可抑制HepG2細(xì)胞的遷移能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3030453