[背 景]CD8+T細胞在細胞免疫中起重要作用,是抗腫瘤的主要效應(yīng)細胞,可識別特定的腫瘤抗原,進而分泌IFN-γ、穿孔素、顆粒酶等調(diào)節(jié)及發(fā)揮殺傷腫瘤細胞的作用。而Tregs能通過干擾腫瘤細胞的抗原提呈、表達抑制性受體、分泌抑制性分子、借助代謝調(diào)控如耗竭IL-2等機制,來抑制抗腫瘤效應(yīng)細胞作用,從而幫助腫瘤細胞實現(xiàn)免疫逃逸。效應(yīng)細胞與免疫抑制細胞的相互作用,決定了腫瘤的發(fā)展方向。腫瘤浸潤的效應(yīng)T細胞常因受到腫瘤及免疫抑制細胞的抑制信號傳遞,增殖、功能及生存受到顯著抑制,無法有效識別并殺傷腫瘤細胞。目前臨床上使用的免疫檢查點抑制劑抗體（包括CTLA-4、PD-L1、PD-1等）,通過調(diào)控腫瘤微環(huán)境中的抑制性分子網(wǎng)絡(luò),即實現(xiàn)“免疫正�；�,取得了良好的療效,是腫瘤免疫治療的重大突破。然而,其仍存在顯著不足,如臨床響應(yīng)率有限、系統(tǒng)性免疫激活副作用等。研究表明,在PD-L1高表達的癌癥患者中,許多患者表現(xiàn)出了治療耐藥性。因此,仍需要探索更有效的單一和聯(lián)合免疫療法以增強免疫治療效果。OX40（也被稱作CD134/TNFRSF4）是第二代免疫檢查點的代表性靶點之一,廣泛表達于炎癥和腫瘤部位,通過傳遞... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．０Ｘ４０研究狀態(tài)分布圖??

結(jié)果??１靶向小鼠０Ｘ４０的病毒樣顆粒疫苗構(gòu)建與制備??１．１以乙肝核心抗原病毒樣顆粒為載體的０Ｘ４０疫苗構(gòu)建。??經(jīng)預(yù)測共獲得７個潛在的抗原表位（Ｐ１－Ｐ７），利用基因重組的手段，在??ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ載體上構(gòu)建誘導(dǎo)型且可穩(wěn)定表達ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０蛋白的ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０??質(zhì)粒（圖２）。將提取的載體質(zhì)粒與ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０重組質(zhì)粒分別應(yīng)用和Ａ／＊??Ｉ進行雙酶切鑒定，１％瓊脂糖電泳分析顯示（圖３，以Ｐ６鑒定為代表），所獲得??的重組質(zhì)粒目的條帶略大于載體質(zhì)粒對應(yīng)條帶，與預(yù)期相符。重組質(zhì)粒送至上海??生物工程股份有限公司測序，分析表明構(gòu)建正確。??ＳａｍＨｆ?￡？０?陽？??ｆＨＢ？Ａ〇．〇ｘ４〇ｉ??圖２重組質(zhì)粒ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０示意圖??３０??

ｂｐ?Ｍ?ＮＰ?Ｐ６??Ｉ?ｃｏｏｌ??５００??圖３重組質(zhì)粒的酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ；?ＮＰ：載體質(zhì)粒雙酶切（Ｐ．ｓ．，１?＋齡Ｉ?）：?Ｐ６：重組質(zhì)粒雙酶切（朽／??１?＋齡?Ｉ?）。??１．２重組蛋白的誘導(dǎo)表達及純化??１．２．１?ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４ｆｌ重組蛋白的誘導(dǎo)表達??轉(zhuǎn)化了重組質(zhì)粒的ＤＨ５ｃｉ閑于液體ＬＢ培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)后，??ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析顯示重組菌都有效表達了目的蛋白（Ｐ１－Ｐ７），其理論分子量分別??約為?１９０００Ｄａ，丨?８９００?Ｄａ，?１８６００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，丨８７００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，１８６００?Ｄａ，??略大于載體質(zhì)粒編碼的蛋白ＨＢｃＡｇ?（以ＮＰ代表，理論分子量為丨７５００?Ｄａ）。如??圖４所示。??ｋＤａ?Ｍ?ＮＰ?ＰＩ?Ｐ２?Ｐ４?ＰＳ?Ｐ３?Ｐ６?Ｐ７??９７．２?一??６６．４?一??４４．３?＊?？?—??２９?一??２０．１?？?＿??■■?鑛轉(zhuǎn)??１４．３?＊?＾５５？—????３１??


本文編號：3027896