[背 景]CD8+T細(xì)胞在細(xì)胞免疫中起重要作用,是抗腫瘤的主要效應(yīng)細(xì)胞,可識(shí)別特定的腫瘤抗原,進(jìn)而分泌IFN-γ、穿孔素、顆粒酶等調(diào)節(jié)及發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。而Tregs能通過(guò)干擾腫瘤細(xì)胞的抗原提呈、表達(dá)抑制性受體、分泌抑制性分子、借助代謝調(diào)控如耗竭IL-2等機(jī)制,來(lái)抑制抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞作用,從而幫助腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。效應(yīng)細(xì)胞與免疫抑制細(xì)胞的相互作用,決定了腫瘤的發(fā)展方向。腫瘤浸潤(rùn)的效應(yīng)T細(xì)胞常因受到腫瘤及免疫抑制細(xì)胞的抑制信號(hào)傳遞,增殖、功能及生存受到顯著抑制,無(wú)法有效識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。目前臨床上使用的免疫檢查點(diǎn)抑制劑抗體（包括CTLA-4、PD-L1、PD-1等）,通過(guò)調(diào)控腫瘤微環(huán)境中的抑制性分子網(wǎng)絡(luò),即實(shí)現(xiàn)“免疫正�；�,取得了良好的療效,是腫瘤免疫治療的重大突破。然而,其仍存在顯著不足,如臨床響應(yīng)率有限、系統(tǒng)性免疫激活副作用等。研究表明,在PD-L1高表達(dá)的癌癥患者中,許多患者表現(xiàn)出了治療耐藥性。因此,仍需要探索更有效的單一和聯(lián)合免疫療法以增強(qiáng)免疫治療效果。OX40（也被稱作CD134/TNFRSF4）是第二代免疫檢查點(diǎn)的代表性靶點(diǎn)之一,廣泛表達(dá)于炎癥和腫瘤部位,通過(guò)傳遞... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．０Ｘ４０研究狀態(tài)分布圖??

結(jié)果??１靶向小鼠０Ｘ４０的病毒樣顆粒疫苗構(gòu)建與制備??１．１以乙肝核心抗原病毒樣顆粒為載體的０Ｘ４０疫苗構(gòu)建。??經(jīng)預(yù)測(cè)共獲得７個(gè)潛在的抗原表位（Ｐ１－Ｐ７），利用基因重組的手段，在??ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ載體上構(gòu)建誘導(dǎo)型且可穩(wěn)定表達(dá)ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０蛋白的ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０??質(zhì)粒（圖２）。將提取的載體質(zhì)粒與ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０重組質(zhì)粒分別應(yīng)用和Ａ／＊??Ｉ進(jìn)行雙酶切鑒定，１％瓊脂糖電泳分析顯示（圖３，以Ｐ６鑒定為代表），所獲得??的重組質(zhì)粒目的條帶略大于載體質(zhì)粒對(duì)應(yīng)條帶，與預(yù)期相符。重組質(zhì)粒送至上海??生物工程股份有限公司測(cè)序，分析表明構(gòu)建正確。??ＳａｍＨｆ?￡？０?陽(yáng)？??ｆＨＢ？Ａ〇．〇ｘ４〇ｉ??圖２重組質(zhì)粒ｐＨＢｃＡｇ－ＯＸ４０示意圖??３０??

ｂｐ?Ｍ?ＮＰ?Ｐ６??Ｉ?ｃｏｏｌ??５００??圖３重組質(zhì)粒的酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ；?ＮＰ：載體質(zhì)粒雙酶切（Ｐ．ｓ．，１?＋齡Ｉ?）：?Ｐ６：重組質(zhì)粒雙酶切（朽／??１?＋齡?Ｉ?）。??１．２重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化??１．２．１?ＨＢｃＡｇ－ＯＸ４ｆｌ重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)??轉(zhuǎn)化了重組質(zhì)粒的ＤＨ５ｃｉ閑于液體ＬＢ培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)后，??ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析顯示重組菌都有效表達(dá)了目的蛋白（Ｐ１－Ｐ７），其理論分子量分別??約為?１９０００Ｄａ，丨?８９００?Ｄａ，?１８６００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，丨８７００?Ｄａ，?１９０００?Ｄａ，１８６００?Ｄａ，??略大于載體質(zhì)粒編碼的蛋白ＨＢｃＡｇ?（以ＮＰ代表，理論分子量為丨７５００?Ｄａ）。如??圖４所示。??ｋＤａ?Ｍ?ＮＰ?ＰＩ?Ｐ２?Ｐ４?ＰＳ?Ｐ３?Ｐ６?Ｐ７??９７．２?一??６６．４?一??４４．３?＊?？?—??２９?一??２０．１?？?＿??■■?鑛轉(zhuǎn)??１４．３?＊?＾５５？—????３１??


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